Waters 采用大孔徑酰胺開發(fā)糖基化蛋白的高分離度

親水作用色譜（HILIC）已經(jīng)作為一種分離強極性化合物的工具得到廣泛應(yīng)用。事實上，它已經(jīng)成為一種較為普遍的小分子分離技術(shù)。相比之下，即使HILIC的分離選擇性在某些情況下（如在糖基化蛋白質(zhì)的表征中）具有很大價值，HILIC在大分子方面的應(yīng)用仍相對有限。分析蛋白糖基的一種標(biāo)準(zhǔn)方法是通過酶或化學(xué)方法將其從對應(yīng)蛋白質(zhì)中釋放出來，然后采用HILIC進行色譜分離。以經(jīng)過優(yōu)化的亞2 μm酰胺鍵合固定相為基礎(chǔ)的UPLC型分離通過提高分離速度與分離度，*顛覆了游離蛋白糖基的HILIC分離。盡管游離糖基分析是一種黃金標(biāo)準(zhǔn)方法，但一直以來它都需要冗長而繁瑣的樣品制備技術(shù)。雖然zui近推出的GlycoWorks™RapiFluor-MS™ N-糖分析試劑盒能夠彌補多數(shù)不足，但在有些情況下仍需要研究表征糖基化蛋白的替代方法，例如在需要闡明修飾位點時。

為了在糖基仍連接在對應(yīng)蛋白質(zhì)上時即對其進行補充分析，我們推出了經(jīng)優(yōu)化的HILIC固定相及相應(yīng)方法用于分離完整糖蛋白和消化糖蛋白的糖型。研究采用大孔徑（300Å）酰胺鍵合有機硅（亞乙基橋雜化，BEH）固定相和精心開發(fā)的方法，實現(xiàn)了對質(zhì)量范圍為10~150 kDa的完整蛋白質(zhì)糖型的出色分離。