免疫印跡（Western Blot, WB）是70年代末80年代初發(fā)展起來的蛋白質(zhì)測定技術(shù)。也是一綜合性的免疫學檢測技術(shù).廣泛應(yīng)用于生物樣品中是否存在某一蛋白質(zhì)(抗原)的檢測.也可用于粗略測定抗原蛋白的相對含量和抗原多肽鏈的相對分子量。

印跡法(blotting)是指將樣品轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用相應(yīng)的探測反應(yīng)來檢測樣品的一種方法。也是檢測蛋白質(zhì)混合液體中某種特定目的蛋白的定性方法，也可作為確定同一種蛋白質(zhì)在不同細胞或者同一種細胞不同條件下的相對含量的半定量方法。兩種方法均來自Western Blot, WB實驗。年末技術(shù)部有發(fā)布動態(tài)。勁馬正式開通免疫印跡技術(shù)服務(wù)，歡迎新老顧客代測。

上海勁馬實驗設(shè)備有限公司W(wǎng)estern Blot實驗技術(shù)服務(wù)分析

 一、概述

     Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應(yīng)，先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開，再利用電場力的作用將膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到固相載體上，然后再加上抗體形成抗原抗體復合物，再利用發(fā)光或顯色的原理將結(jié)果顯示到膜或者底片上。

     SDS-PAGE電泳的高分辨率以及固相免疫測定的特異性和敏感性保證了zui終實驗結(jié)果的準確性。WB是半定量實驗，相比較于定性實驗有數(shù)據(jù)分析，但是需要嚴格的參照標準，因此不是準確的數(shù)量關(guān)系，這也是與定量試驗的不同之處。

二、技術(shù)流程

1.根據(jù)目標蛋白在細胞中的位置（細胞核中，細胞漿中，細胞膜上）和目標蛋白的性質(zhì)（變性以及非變性）選擇合適的提取蛋白的方法

2.用合適的方法例如Bradford或者BCA法測定蛋白含量

3.根據(jù)目標蛋白的大小制作合適濃度的SDS凝膠

4.根據(jù)目標蛋白的大小選擇合適的電泳電壓以及電泳時間

5.根據(jù)目標蛋白的大小以及剪切的凝膠的大小選擇合適的轉(zhuǎn)膜電流以及轉(zhuǎn)膜時間

6.根據(jù)目標蛋白的性質(zhì)選擇合適的封閉方法，例如脫脂奶粉，BSA等方法封閉

7選擇合適濃度的一抗進行孵育，洗膜

8選擇合適濃度的二抗進行孵育，洗膜

9 ECL發(fā)光液進行曝光

三、客戶須知

1 檢測樣本：新鮮的組織或者細胞

2 樣本量：檢測細胞樣本的一個指標的zui低細胞含量是1*106，檢測組織樣本的一個指標的zui低組織樣品為30mg（建議多提供樣本，便于研磨）

3 樣本保存：

（1）新鮮的組織樣本：迅速凍存。

（2）懸浮細胞：收集完以后，冷的PBS洗3遍，吸凈殘余的液體，冷凍保存。

（3）貼壁細胞：吸凈培養(yǎng)基以后，預(yù)熱的PBS洗3遍，胰酶收集，再用冷的PBS洗3遍，吸凈殘余液體，冷凍保存；對于不適合用胰酶收集的細胞（例如胰酶處理會消化掉一部分蛋白或者對于目標蛋白有刺激作用），預(yù)熱的PBS洗3遍以后，用細胞刮收集細胞，吸凈殘余的液體，冷凍保存。

 4、請?zhí)崆案嬖V我們：您樣本的種屬（人、大鼠、小鼠、兔、豬等）、樣本數(shù)量、待測指標。

5、樣本郵寄：放入冰袋或者干冰及時寄送，建議選擇順豐快遞陸運或者中通快遞陸運。

四、報告內(nèi)容及標準

1  目的蛋白曝光照片一張

2  電子版目的蛋白和內(nèi)參的照片

3  灰度分析數(shù)據(jù)一份

4  蛋白含量數(shù)據(jù)

5  完整的實驗報告（試驗方法，試驗參數(shù)，實驗儀器參數(shù)）

五、收費標準及服務(wù)周期

    收費標準及服務(wù)周期因根據(jù)客戶提供的樣品不同而有所改變，詳細請跟客服專員或參考所簽署的合作合同。

六、質(zhì)量保證

    良好的實驗平臺體系，*的儀器設(shè)備以及從事WB實驗多年的服務(wù)團隊為您zui終滿意的實驗結(jié)果保駕護航。

七、售后服務(wù)

    本公司會不定期進行顧客回訪，以提高我們的服務(wù)質(zhì)量。本條款以所簽訂的合作合同為依據(jù)，詳情會因合同內(nèi)容的不同而有所差異。