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植物β-淀粉酶（β-amylase）ELISA 試劑盒　

本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為抗植物β-amylase單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體，經生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。

植物β-淀粉酶（β-amylase）ELISA 試劑盒自備材料
   1． 蒸餾水。
   2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
   3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
   安全性
   1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
   2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
   3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
   操作注意事項
   1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
   2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
   3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
   4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
   5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品
   
   6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
   7． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
   8． 加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
   9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
   樣品收集、處理及保存方法
   1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
   2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆
   3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
   4、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
   操作步驟
   1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
   2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
   3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
   4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
   5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
   6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
   7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
   8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
   9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

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