原理
天狼猩紅和其襯染液都是強(qiáng)酸性染料,易與膠原分子中的堿性基團(tuán)結(jié)合,吸附牢靠。偏振光鏡檢查,膠原纖維有正的單軸雙折來射光的屬性,與天狼星紅染色液結(jié)合后,可增強(qiáng)雙折射,提高分辨率,從而區(qū)分兩型膠原源纖維。
實驗流程
石蠟切片脫蠟至水→天狼猩紅染色→脫水封片→鏡檢
實驗結(jié)果
光學(xué)顯微鏡下膠原纖維紅色,背景黃色;偏振光下,Ⅰ型膠原呈橘黃色或亮紅色的粗纖
維,Ⅲ型膠原呈綠色的細(xì)纖維。
注意事項
①做石蠟包埋樣本保存及運輸:常溫置于4%多聚甲醛固定液內(nèi)保存及運輸(需注意固定液的量是組織的10倍以上,樣本需浸泡于固定液內(nèi)并防止樣本貼壁固定不良,大標(biāo)本使用大的標(biāo)本瓶/袋運輸,建議在大標(biāo)本上按取材包埋要求做多條平行切口,以防標(biāo)本中心固定不透徹。運輸過程中防止固定液滲漏)。
②做冰凍切片樣本保存及運輸:冰凍切片制片應(yīng)取用新鮮組織,-80℃或液氮保存,干冰運輸。
③樣本接收:石蠟切片、冰凍切片、細(xì)胞爬片
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