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酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Elisa）概論

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專(zhuān)一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù) (enzyme-linked immunospot assay, ELISpot) 是細(xì)胞免疫學(xué)研究中敏感的檢測(cè)方法之一，能夠區(qū)分活化的T細(xì)胞亞群，可以在單細(xì)胞水平對(duì)抗體分泌細(xì)胞及細(xì)胞因子分泌細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。在疫苗研究中，ELISpot是一種標(biāo)準(zhǔn)工具，用于通過(guò)測(cè)量激發(fā)強(qiáng)大T細(xì)胞反應(yīng)的能力 (通常是干擾素-γ的分泌) 來(lái)確定疫苗的有-效性。為滿(mǎn)足客戶(hù)的檢測(cè)需求，義翹神州可提供ELISA檢測(cè)服務(wù)和ELISpot檢測(cè)服務(wù)。

義翹神州提供專(zhuān)業(yè)的ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)，擁有6000多種優(yōu)質(zhì)ELISA應(yīng)用抗體，500種ELISA檢測(cè)試劑盒。

ELISA/ELISpot檢測(cè)技術(shù)服務(wù)流程

ELISpot檢測(cè)服務(wù)案例

在臨床試驗(yàn)和候選疫苗中，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）是發(fā)揮細(xì)胞免疫的一類(lèi)重要細(xì)胞。而 IFN-γ 作為免疫活性細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子在誘導(dǎo)抗病毒免疫中起著重要的免疫調(diào)理作用，因此 IFN-γ 的ELISpot是評(píng)價(jià)抗原特異性T細(xì)胞免疫的金標(biāo)準(zhǔn)。

ELISpot檢測(cè)小鼠T細(xì)胞經(jīng)特異性肽段刺激分泌IFN-γ 的情況。

ELISpot檢測(cè)小鼠T細(xì)胞經(jīng)特異性肽段刺激分泌IL-4 的情況。

ELISA/ELISpot檢測(cè)相關(guān)內(nèi)容

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISpot）檢測(cè)是兩種基于抗原-抗體反應(yīng)的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，它們?cè)谏镝t(yī)學(xué)研究和診斷中有著廣-泛的應(yīng)用。

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）：

定義：ELISA是一種定性和半定量或定量檢測(cè)方法，利用抗原-抗體反應(yīng)的原理，通過(guò)酶標(biāo)記的抗體來(lái)檢測(cè)特定抗原或抗體的存在和量5758。

試驗(yàn)原理：

抗原或抗體被固定在固相載體（通常是96孔板）上。

加入特異性抗體，這些抗體會(huì)與固相載體上的抗原或抗體結(jié)合。

清洗去除未結(jié)合的抗體。

加入酶標(biāo)記的二抗體，它與固相上的抗體結(jié)合。

再次清洗去除未結(jié)合的二抗體。

加入酶的底物，酶催化底物產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)（如顏色變化或熒光）。

通過(guò)光度計(jì)測(cè)定吸光度或熒光強(qiáng)度，從而定量分析目標(biāo)分子的濃度。

Tips：

• 需要特異性的抗體對(duì)。

• 可進(jìn)行直接ELISA（抗原固定后直接使用酶標(biāo)記的抗體檢測(cè)）或間接ELISA（使用非標(biāo)記的一抗后，再用酶標(biāo)記的二抗檢測(cè)）。

• 夾心ELISA可以同時(shí)使用兩種特異性抗體夾住抗原。

• 競(jìng)爭(zhēng)ELISA中，樣本中的抗原與標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)有限的抗體結(jié)合位點(diǎn)。

• 可用于高通量篩選和定量分析。

• 需要控制實(shí)驗(yàn)條件，如孵育時(shí)間和溫度，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

ELISpot（Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay）：

定義：ELISpot是一種高靈敏度的細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，用于檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞分泌特定蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子）的能力5051。

試驗(yàn)原理：

使用特異性捕獲抗體預(yù)先包被固相載體（通常是PVDF膜的孔板）。

將細(xì)胞與刺激物一起孵育在包被的孔中，細(xì)胞在刺激下分泌特定蛋白質(zhì)。

分泌的蛋白質(zhì)被固相上的捕獲抗體捕獲，形成斑點(diǎn)。

清洗去除未結(jié)合的細(xì)胞和蛋白質(zhì)。

加入生物-素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，與捕獲的蛋白質(zhì)結(jié)合。

加入鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物，與生物-素標(biāo)記的抗體結(jié)合。

加入顯色底物，酶催化底物產(chǎn)生不溶性色素，形成可見(jiàn)斑點(diǎn)。

斑點(diǎn)的數(shù)量和強(qiáng)度與分泌細(xì)胞的數(shù)量和活性成正比。

Tips：

• 可在單細(xì)胞水平上檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌。

• 高靈敏度和特異性，可以檢測(cè)極少量的細(xì)胞因子。

• 斑點(diǎn)的數(shù)量代表分泌特定蛋白質(zhì)的細(xì)胞數(shù)量。

• 可用于評(píng)估疫苗效果、細(xì)胞免疫反應(yīng)、自身免疫疾病研究等。

• 實(shí)驗(yàn)操作需要嚴(yán)格控制，包括細(xì)胞培養(yǎng)條件、刺激物的選擇、孵育時(shí)間等。

• 需要使用專(zhuān)門(mén)的讀板儀和分析軟件來(lái)計(jì)數(shù)和分析斑點(diǎn)。

這兩種技術(shù)各有特點(diǎn)，ELISA適合于定量分析樣本中的蛋白質(zhì)濃度，而ELISpot更適合于評(píng)估細(xì)胞免疫反應(yīng)和檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞的活性。

詳細(xì)信息可查看義翹神州，或者可加微信“sinobio2023”進(jìn)行聯(lián)系。