Anti-p-CaMKII（Thr286）抗體,磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體

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【產(chǎn)品編號(hào)】：BYK-1647R

【產(chǎn)品規(guī)格】：0.1ml/0.2ml

【產(chǎn)品價(jià)格】：詢價(jià)（電詢 客服:）

【抗體來源】：Rabbit OR Mouse

【產(chǎn)品用途】：科研實(shí)驗(yàn)，用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，WB實(shí)驗(yàn)，相應(yīng)的標(biāo)記抗體有HRP標(biāo)記抗體，F(xiàn)ITC標(biāo)記，BIO等。
【性 狀】： Lyophilized or Liquid
【濃 度】： 1mg/1ml
【亞 型】： IgG

【貯 存】： 貯存于-20℃.

Anti-p-CaMKII（Thr286）抗體,磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體應(yīng)用于WB實(shí)驗(yàn)蛋白提樣品制備步驟：
1、 將培養(yǎng)液吸入至15 ml離心管中，于2500 rpm離心5 min。
2、 棄上清，加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌，然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次。
3、 用槍吸干上清后，加100 μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30 min，裂解過程中要經(jīng)常彈一彈以使細(xì)胞充分裂解。
4、將裂解液4℃、12000 rpm離心5 min，取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法測蛋白濃度
SDS－PAGE電泳
1、 玻璃板對齊后放入夾中卡緊，然后垂直卡在架子上準(zhǔn)備灌膠。
2、按前面方法配10％分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時(shí)，可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出，待膠面升到綠帶中間線高度時(shí)即可。然后膠上加一層水，液封后的膠凝的更快。（灌膠時(shí)開始可快一些，膠面快到所需高度時(shí)要放慢速度。操作時(shí)膠一定要沿玻璃板流下，這樣膠中才不會(huì)有氣泡。加水液封時(shí)要慢，否則膠會(huì)被沖變型。）
3、 當(dāng)水和膠之間有一條折射線時(shí)，說明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4、 按方法配4％的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時(shí)也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生。插梳子時(shí)要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后，兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5、 用水沖洗濃縮膠，將其放入電泳槽中。
6、 測完蛋白含量后，計(jì)算含20-50 μg蛋白（根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，沒有固定的量）的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至200 μl的EP管中，加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開始準(zhǔn)備上樣。（電泳液至少要漫過內(nèi)測的小玻璃板。）用微量進(jìn)樣器貼壁吸取樣品，將樣品吸出不要吸進(jìn)氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品（包括一孔做可視的蛋白marker）。（加樣太快可使樣品沖出加樣孔，若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個(gè)樣品時(shí)，進(jìn)樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數(shù)次，以免交叉污染）
8、電泳：濃縮膠時(shí)用80-100 V跑，到分離膠以后用150-200 V跑，總時(shí)間2 h左右，電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳，進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

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