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活性氧檢測試劑盒 solarbio 細(xì)胞檢測試劑
產(chǎn)品編號:CA1410
活性氧檢測試劑盒 solarbio 細(xì)胞檢測試劑
產(chǎn)品簡介:
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物(O2•−, H2O2, •OH, ONOO−, •NO)等,參與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。采用2,7-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA)是迄今常用、靈敏的細(xì)胞內(nèi)活性氧檢探針。 DCFH-DA沒有熒光,進(jìn)入細(xì)胞后被酯酶水解為dichlorofluorescin (DCFH)。在活性氧存在時DCFH被氧化為不能透過細(xì)胞膜的強(qiáng)綠色熒光物質(zhì)dichlorofluorescein (DCF),其熒光在激發(fā)波長 502 nm,發(fā)射波長 530 nm附近有大波峰,強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)活性氧水平成正比。此活性氧檢測系統(tǒng)本底低,靈敏度高,重復(fù)性好,操作簡便。
本活性氧檢測試劑盒適于熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡等圖像檢測,和微板熒光分析儀(multiwell fluorescence plate reader)、流式細(xì)胞儀定量 ROS檢測。
活性氧檢測試劑盒 solarbio 細(xì)胞檢測試劑工作波長:
佳激發(fā)波長 500、485 (500 ± 15 nm),佳發(fā)射波長 525 (530 ± 20 nm)。也可按照 FITC 熒光檢測條件檢測。
活性氧檢測試劑盒 solarbio 細(xì)胞檢測試劑操作步驟:
一、試劑準(zhǔn)備:
1. DCFH-DA 可稀釋于培養(yǎng)基或緩沖液中。血清或培養(yǎng)基顏色并不影響 DCFH-DA 及細(xì)胞內(nèi)熒光產(chǎn)生,但可能會影響熒光顯微鏡觀察,干擾熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀熒光測定。可將 DCFH-DA 稀釋于無酚紅培養(yǎng)基或適宜的緩沖液如 PBS 中。這依賴于使用何種熒光設(shè)備進(jìn)行測定。
2. 加入 DCFH-DA 的時機(jī)或孵育時間,以終能順利檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧為目的。藥物處理時間較短(<2小時)或預(yù)計(jì) ROS 效應(yīng)較弱,可先加或同時加入 DCFH-DA。反之,treat 刺激時間較長(>6 小時)或預(yù)計(jì)產(chǎn)生ROS效應(yīng)較強(qiáng),可后加 DCFH-DA。
3. 活性氧供體含高純度 12 mM H2O2。加入細(xì)胞后其本身即是一種活性氧,而且在代謝過程中可產(chǎn)生其它類型的活性氧,均可使 DCFH-DA氧化為 DCF呈現(xiàn)強(qiáng)綠色熒光。因而,用戶可使用該試劑作為測試實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)或儀器的陽性試劑,以初步觀察細(xì)胞活性氧所產(chǎn)生的熒光的一般特征,并且也可以將該實(shí)際作為實(shí)驗(yàn)的一個陽性對照。*該試劑的細(xì)胞工作濃度為 20~100 µM 或更低濃度,但超過 200µM 將產(chǎn)生細(xì)胞毒。如果用戶熟悉 ROS熒光或?qū)嶒?yàn)沒有必要采用陽性對照,可以不加該試劑。
二、加入熒光探針:
1. 加入 DCFH-DA 于培養(yǎng)基,*初始工作濃度為 10 µM。對不同的細(xì)胞和處理,DCFH-DA 工作濃度可為 100 nM~20 µM,需進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適的濃度。總體稀釋倍數(shù)應(yīng)在 1:500~1000 以上以避免 DMSO 對細(xì)胞的影響。以 DMSO 作為溶劑對照。
2. 37 ºC 孵育細(xì)胞 30min~至幾個小時,通常 30-60min 即可。孵育時間長短與細(xì)胞類型、刺激條件、DCFH-DA濃度有關(guān)。
3. PBS洗滌細(xì)胞 2 次。
三、熒光檢測
采用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡圖像檢測照相,綠色熒光強(qiáng)度代表活性氧水平。也可進(jìn)行微板熒光分析儀(multiwell fluorescence plate reader)實(shí)時或每 10 分鐘分時逐點(diǎn)檢測熒光強(qiáng)弱。對于流式細(xì)胞儀可將細(xì)胞用胰酶消化 PBS 洗滌后重懸檢測。
活性氧檢測試劑盒 solarbio 細(xì)胞檢測試劑相關(guān)產(chǎn)品:
CA1020 ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒
CA1080 支原體檢測試劑盒
CA1120 Hoechst 33342/PI雙染試劑盒
CA1140 吖啶橙(AO)-EB雙染色試劑盒
CA1210 CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒
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CA1410 活性氧檢測試劑盒
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D1110 質(zhì)粒大量提取試劑盒
D1120 革蘭氏陽性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒
D1130 革蘭氏陽性菌質(zhì)粒大量提取試劑盒
D1140 無內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒
D1150 無內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒
D1160 酵母質(zhì)粒提取試劑盒
D1250 聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒
D1300 DNA產(chǎn)物純化試劑盒
D1500 植物基因組DNA提取試劑盒
D1600 細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒
D1700 動物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒
D1800 全血基因組DNA提取試劑盒
D1850 全血基因組DNA提取試劑系統(tǒng)
D1900 酵母基因組DNA提取試劑盒
D2100 通用基因組DNA提取試劑盒
D2300 真菌基因組DNA提取試劑盒
D2400 DNA病毒基因組提取試劑盒
D2600 土壤基因組DNA提取試劑盒
D2700 糞便基因組DNA提取試劑盒