人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基

人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基
虔碧生物的人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基根據人骨髓間充質干細胞的生長需要，培養(yǎng)基包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質以及其他補給成分。非常適用于培養(yǎng)人骨髓間充質干細胞。產品嚴格無菌，無病毒和支原體，性能穩(wěn)定，使用該培養(yǎng)基能使人骨髓間充質干細胞在理想營養(yǎng)平衡狀態(tài)下進行多代擴增而不發(fā)生分化（至少10代以內）。

虔碧生物的根據人骨髓間充質干細胞的生長需要，培養(yǎng)基包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質以及其他補給成分。非常適用于培養(yǎng)人骨髓間充質干細胞。產品嚴格無菌，無病毒和支原體，性能穩(wěn)定，使用該培養(yǎng)基能使人骨髓間充質干細胞在理想營養(yǎng)平衡狀態(tài)下進行多代擴增而不發(fā)生分化（至少10代以內）。

★ 產品內容

★ 使用注意事項

1.在配制*培養(yǎng)基前，請把間充質干細胞無動物源生長添加劑(MSCGS-xf)、青霉素-鏈霉素(P/S)放到2-8℃冰箱過YE解凍，然后加入基礎培養(yǎng)基中。

2.在使用*培養(yǎng)基前，需要把培養(yǎng)基放到37℃恒溫水浴中預熱，注意溫度不要超過37℃。

3.請把配制好的*培養(yǎng)基放在4℃冰箱避光保存，并盡量在一個月內使用完。若培養(yǎng)基要分幾次使用，請將間充質干細胞無動物源生長添加劑(MSCGS-xf)、青霉素-鏈霉素 (P/S)解凍按用量分裝后保存。

4.可不包被培養(yǎng)瓶，但配合貼壁材料Attachin（貨號BW110028）使用效果更佳。

★ 培養(yǎng)條件

37℃，5% CO2，無菌恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

★ 相關操作

人骨髓間充質干細胞復蘇

1.把人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基放入37℃水浴中預熱；
2.從液氮中取出人骨髓間充質干細胞迅速放入37℃水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)孵育細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml的人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml的人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基重懸細胞，轉移到T-25培養(yǎng)瓶中（帶濾芯）；
5.將培養(yǎng)瓶置于37℃，5% CO2的無菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6.第二天，用新鮮的人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基給細胞換液。

人骨髓間充質干細胞傳代培養(yǎng)

1.在顯微鏡下觀察細胞（細胞生長在人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基中，且是次傳代），當細胞融合度超過80%時，即可傳代；

2.37℃水浴預熱培養(yǎng)基；

3.在超凈臺中，棄掉T-25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，加入2ml PBS清洗，再加入1ml 0.25%胰酶-EDTA消化細胞；

4.在顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，即可加入5ml人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基終止消化；

5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細胞，并輕輕吹打將細胞吹散；

6.將細胞轉移到15ml離心管中，1000rpm離心5min；

7.棄上清，加入15-20ml的人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T-75細胞培養(yǎng)瓶中或按適當比例傳到 T-25細胞培養(yǎng)瓶中。確保細胞貼壁后融合度在25-50%之間，細胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25 瓶），混合細胞懸液，確保細胞均勻分布；

8.將細胞培養(yǎng)瓶置于37℃，5% CO2的無菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

9.每兩天用新鮮、預熱的人骨髓間充質干細胞無動物源培養(yǎng)基進行換液。

人骨髓間充質干細胞凍存

人骨髓間充質干細胞凍存可用虔碧的“無DMSO無動物源細胞凍存液”,具體操作如下。

1. 細胞消化和計數，用胰酶對待凍存的細胞進行消化，并對細胞進行計數。

2. 1000rpm離心5分鐘，去掉上清。

3. 根據細胞計數的情況，加入適量的凍存液，使細胞密度在1×106/ml左右（或根據自己希望達到的細胞密度）。

4. 輕輕地重懸細胞（務必重懸均勻），將重懸的細胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標記或者貼上標簽）中，旋緊凍存管蓋。

5. 將凍存管放入程序降溫凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃。

6. 第二天將細胞從-80℃轉移到液氮中。

注：如客戶用自己配制的凍存液凍存細胞，請避免用甘油作為保護劑。