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免疫熒光三標(biāo)四色（切片）

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海信帆生物科技有限公司
  • 品牌 GEMIG
  • 型號
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時間 2024/11/19 16:37:59
  • 訪問次數(shù) 1456
產(chǎn)品標(biāo)簽

免疫熒光三標(biāo)四色（切片）

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關(guān)于我們

  上海信帆生物科技有限公司（Shanghai Xinfan Biotechnology Co.,Ltd）成立于上海，是一家集“產(chǎn)品研發(fā)、銷售、技術(shù)服務(wù)”為一體的生物公司。經(jīng)過多年的努力發(fā)展已成為專業(yè)供應(yīng)各類生物科研用品的公司，長期專注于生物領(lǐng)域，旗下代理產(chǎn)品種類眾多。信帆生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本，以市場需求為導(dǎo)向，以為客戶創(chuàng)造價值為己任的精神，堅守產(chǎn)品質(zhì)量的可靠、穩(wěn)定，并嚴(yán)格秉承“專業(yè)、誠實(shí)、守信、創(chuàng)新”全過程、多方位的質(zhì)量監(jiān)控檢測，從包裝到品質(zhì)，從產(chǎn)品到服務(wù)，每個環(huán)節(jié)，我們都嚴(yán)控質(zhì)量關(guān)，力求為客戶提供更好的、更專業(yè)性的技術(shù)服務(wù)和科研產(chǎn)品。我們供應(yīng)的產(chǎn)品包括elisa試劑盒，生化試劑盒，動物血制品，抗體，質(zhì)控品，干擾物質(zhì)，抗原，生化試劑，實(shí)驗(yàn)耗材等10萬余種類，公司長期致力于為客戶提供RT-PCR檢測、病理染色、免疫組化檢測、Western blotting檢測、生化檢測、ELISA檢測、放免檢測等一系列實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)。產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個領(lǐng)域。


主營業(yè)務(wù)
   主營產(chǎn)品: 質(zhì)控品，干擾物質(zhì)，抗體抗原，elisa試劑盒，動物血制品，生化試劑盒等。實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：HE染色/特殊染色/技術(shù)服務(wù)、免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)、Western blotting實(shí)驗(yàn)服務(wù)、RT-PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),QPCR(熒光定量PCR）、酶聯(lián)免疫ELISA、生化測試、液相氣相檢測、RACE、全基因合成、線粒體測序、基因克隆、定點(diǎn)突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)等。經(jīng)銷品牌：Abcam、Sigma、CST、Amresco、BD、Enzo、Bio-Rad、merck、Santa Cruz、Jackson、R&D、Merck Millipore、gibco、hyclone、Bio-World、NEB、Tocris、Corning、Axygen等等。


核心價值

  公司本著以專業(yè)的產(chǎn)品、合理的價格、完善的服務(wù)，為客戶提供更好的，更專業(yè)的技術(shù)服務(wù)和科研產(chǎn)品。公司以“質(zhì)量為重，專業(yè)服務(wù)”的原則，致力于為用戶提供高性價比的試劑盒和檢測服務(wù)，提供全程咨詢和技術(shù)支持，包括確定測定指標(biāo)、選擇合適的試劑盒規(guī)格、試劑盒保存、預(yù)測定和測定結(jié)果分析等。高質(zhì)量的產(chǎn)品，讓用戶省心；專業(yè)的檢測服務(wù)，讓用戶省力；優(yōu)惠的價格，讓用戶省錢。信帆生物為廣大用戶提供各類檢測服務(wù)，幫助老師輕松獲得了真實(shí)可靠的檢測數(shù)據(jù)，顯著提高了用戶的科研效率，為其發(fā)表高水平的研究論文提供了堅實(shí)的平臺；為研究生按時畢業(yè)，導(dǎo)師順利結(jié)題、申請新課題和晉升職稱提供了實(shí)實(shí)在在的幫助，公司客戶遍布國內(nèi)各大學(xué)、醫(yī)院、研究所、衛(wèi)生防疫、生物公司等單位。






ELISA試劑盒，國產(chǎn)ELISA試劑盒，進(jìn)口elisa試劑盒，食品檢測試劑盒，農(nóng)殘試劑盒，化學(xué)培養(yǎng)基及生物標(biāo)準(zhǔn)品等

供貨周期 現(xiàn)貨

免疫熒光三標(biāo)四色（切片）

服務(wù)介紹：

免疫熒光三標(biāo)即利用酪胺信號放大（TSA，Tyramide signal amplification）即TSA技術(shù)，在同一張切片上對三種蛋白同時進(jìn)行標(biāo)記，從而可實(shí)現(xiàn)對多種蛋白空間定位，定性及半定量分析。

TSA技術(shù)主要原理為熒光標(biāo)記的酪胺在二抗上偶聯(lián)的HRP與H2O2的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街诎袠?biāo)周圍的蛋白酪-氨酸殘基上，此結(jié)合是共價結(jié)合。而一抗與靶標(biāo)、二抗與一抗之間是非共價結(jié)合。通過抗體洗脫液處理，非共價結(jié)合的一抗二抗被洗脫掉，而共價結(jié)合的熒光酪胺依然附著在靶標(biāo)周圍，將靶標(biāo)通過熒光標(biāo)記顯示出來。在檢測第二個靶標(biāo)時，相當(dāng)于全新的一輪標(biāo)記，無需考慮第二輪的抗體是否與第一輪的抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)。只需改變不同種類熒光染料標(biāo)記TSA即可實(shí)現(xiàn)多個靶標(biāo)的標(biāo)記。通過多次重復(fù)免疫標(biāo)記，使用不同的熒光酪胺實(shí)現(xiàn)雙重或多重?zé)晒馊旧?/span>

名稱

規(guī)格

免疫熒光三標(biāo)四色（切片）

張

 

送樣運(yùn)輸要求：

1、石蠟切片常溫保存運(yùn)輸，冰凍切片﹣20℃保存運(yùn)輸

2、細(xì)胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌，無菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)大體流程：

石蠟切片脫蠟至水——微波抗原修復(fù)——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育第一種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——抗體洗脫——血清封閉——孵育第二種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF555-TSA——抗體洗脫——血清封閉——孵育第三種一抗

——孵育HRP二抗——孵育iF647-TSA——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。

（TSA熒光染料的搭配及加樣順序根據(jù)各抗體的表達(dá)情況來確定。）

實(shí)驗(yàn)具體流程：

1、石蠟切片脫蠟至水：依次將石蠟切片放入環(huán)保型脫蠟液I 10min-環(huán)保型脫蠟液II 10min-環(huán)保型脫蠟液III 10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-無水乙醇Ⅲ 5min-蒸餾水洗。

2、抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿抗原修復(fù)緩沖液PH 6.0 檸檬酸； PH 9.0 EDTA；PH 8.0 EDTA）的抗原修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。維持緩沖液沸騰10min左右，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min(修復(fù)液種類和修復(fù)條件根據(jù)組織來確定，優(yōu)先推薦 PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液）。

3、畫圈, 雙氧水封閉：切片稍甩干后用免疫組化筆在組織周圍畫圈（防止試劑流走），切片平放于避光濕盒滴加3%雙氧水溶液，室溫避光孵育25 min左右，封閉內(nèi)源性過氧化物酶。將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

4、血清封閉:切片平放于避光濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉，一抗其它來源的用3%BSA封閉。

5、加第一種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。

6、加對應(yīng)種屬HRP標(biāo)記二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后平放于透明濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。

7、加iF488-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF488-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

8、抗體洗脫：切片稍甩干后，滴加抗體洗脫液鋪滿整個組織，室溫孵育5 min后去除抗體洗脫液，再次滴加足量的抗體洗脫液完-全覆蓋組織，37°C孵育30 min，孵育完成后將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

9、血清封閉:切片平放于避光濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉，一抗其它來源的用3%BSA封閉。

10、加第二種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。

11、加對應(yīng)種屬HRP標(biāo)記二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。

12、加iF555-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF555-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

13、抗體洗脫：切片稍甩干后，滴加抗體洗脫液鋪滿整個組織，室溫孵育5 min后去除抗體洗脫液，再次滴加足量的抗體洗脫液完-全覆蓋組織，37°C孵育30 min，孵育完成后將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

14、血清封閉:切片平放于避光濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉，一抗其它來源的用3%BSA封閉。

15、加第三種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。

16、對應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。

17、加iF647-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF647-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

18、DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

19、自發(fā)熒光淬滅：切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min，流水沖洗10min。

20、封片：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。






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