免疫熒光六標(biāo)七色（雙寬玻片）
- 公司名稱 上海信帆生物科技有限公司
- 品牌 GEMIG
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/11/19 11:50:46
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ELISA試劑盒，國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒，進(jìn)口elisa試劑盒，食品檢測(cè)試劑盒，農(nóng)殘?jiān)噭┖?，化學(xué)培養(yǎng)基及生物標(biāo)準(zhǔn)品等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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免疫熒光六標(biāo)七色（雙寬玻片）
服務(wù)介紹：
免疫熒光六標(biāo)即利用酪胺信號(hào)放大（TSA，Tyramide signal amplification）即TSA技術(shù)，在同一張切片上對(duì)六種蛋白同時(shí)進(jìn)行標(biāo)記，從而可實(shí)現(xiàn)對(duì)多種蛋白空間定位，定性及半定量分析。
TSA技術(shù)主要原理為熒光標(biāo)記的酪胺在二抗上偶聯(lián)的HRP與H2O2的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街诎袠?biāo)周圍的蛋白酪-氨酸殘基上，此結(jié)合是共價(jià)結(jié)合。而一抗與靶標(biāo)、二抗與一抗之間是非共價(jià)結(jié)合。通過(guò)微波處理，非共價(jià)結(jié)合的一抗二抗被打斷并洗脫掉，而共價(jià)結(jié)合的熒光酪胺依然附著在靶標(biāo)周圍，將靶標(biāo)通過(guò)熒光標(biāo)記顯示出來(lái)。在檢測(cè)第二個(gè)靶標(biāo)時(shí)，相當(dāng)于全新的一輪標(biāo)記，無(wú)需考慮第二輪的抗體是否與第一輪的抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)。只需改變不同種類熒光染料標(biāo)記TSA即可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶標(biāo)的標(biāo)記。通過(guò)多次重復(fù)免疫標(biāo)記，使用不同的熒光酪胺實(shí)現(xiàn)雙重或多重?zé)晒馊旧?/span>
名稱 | 規(guī)格 |
免疫熒光六標(biāo)七色（雙寬玻片） | 張 |
送樣運(yùn)輸要求：
1、組織樣本放置于10倍樣本體積的通用型組織固定液中固定24h以上，常溫保存運(yùn)輸石蠟包埋切片。切勿冷凍結(jié)冰，切勿固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
2、石蠟切片常溫保存運(yùn)輸。
實(shí)驗(yàn)大體流程：
石蠟切片脫蠟至水——微波抗原修復(fù)——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育第一種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF440-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第二種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第三種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF546-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第四種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF594-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第五種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF647-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第六種一抗——孵育HRP二抗孵育iF700-TSA——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。
實(shí)驗(yàn)具體流程：
1、石蠟切片脫蠟至水：依次將石蠟切片放入環(huán)保型脫蠟液I 10min-環(huán)保型脫蠟液II 10min-環(huán)保型脫蠟液III 10min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-無(wú)水乙醇Ⅲ 5min-蒸餾水洗。
2、抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿抗原修復(fù)緩沖液 PH 6.0 檸檬酸； PH 9.0 EDTA；PH 8.0 EDTA）的抗原修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。維持緩沖液沸騰10min左右，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min(修復(fù)液種類和修復(fù)條件根據(jù)組織來(lái)確定）。
3、畫圈, 雙氧水封閉：切片稍甩干后用免疫組化筆在組織周圍畫圈（防止試劑流走），切片平放于避光濕盒滴加3%雙氧水溶液，室溫避光孵育25 min左右，封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
4、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來(lái)源用10%兔血清封閉，一抗其它來(lái)源的用3%BSA封閉。
5、加第一種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用無(wú)菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于透明濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。
6、加對(duì)應(yīng)種屬HRP標(biāo)記二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后平放于透明濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
7、加iF440-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF440-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
8、微波處理：組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。
9、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來(lái)源用10%兔血清封閉，一抗其它來(lái)源的用3%BSA封閉。
10、加第二種一抗：在切片上滴加用無(wú)菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。
11、加對(duì)應(yīng)種屬HRP標(biāo)記二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
12、加iF488-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF488-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
13、微波處理：組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。
14、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來(lái)源用10%兔血清封閉，一抗其它來(lái)源的用3%BSA封閉。
15、加第三種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用無(wú)菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。
16、對(duì)應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
17、加iF546-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF546-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
18、微波處理：組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。
19、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來(lái)源用10%兔血清封閉，一抗其它來(lái)源的用3%BSA封閉。
20、加第四種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用無(wú)菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。
21、對(duì)應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
22、加iF594-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF594-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
23、微波處理：組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。
24、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來(lái)源用10%兔血清封閉，一抗其它來(lái)源的用3%BSA封閉。
25、加第五種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用無(wú)菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。
26、對(duì)應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
27、加iF647-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF647-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
28、微波處理：組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。
29、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來(lái)源用10%兔血清封閉，一抗其它來(lái)源的用3%BSA封閉。
30、加第六種一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用無(wú)菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。
31、對(duì)應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
32、加iF700-TSA：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF700-TSA，避光室溫孵育10min。 孵育完后，將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
33、DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
34、自發(fā)熒光淬滅：切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min，流水沖洗10min。
35、封片：將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
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