色譜柱固定相填充方法與技巧

色譜柱固定相填充方法與技巧

    色譜柱在色譜儀分析檢測過程中起著分離樣品組分的作用，其分離度直接影響色譜儀檢測的靈敏度和速率。影響色譜柱分離度的因素包括固定相和流動相的選擇、流速和溫度的控制、理論塔板高度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性。其中，組分在色譜柱上的分離效果,主要取決于用在填充色譜柱的固定相。

色譜柱固定相填充方法與技巧
    固定相填充質(zhì)量的好壞直接影響填充柱的柱效，因此，色譜柱固定相的填充方法也是很重要的。一根填充質(zhì)量較高的色譜柱，通常其理論塔板數(shù)應(yīng)該達到2000-3000/m，根據(jù)填充物粒度的大小，可分為濕法裝柱和干法裝柱。

    濕法裝柱是先把硅膠用適當?shù)娜軇┌鑴蚝螅偬钊胫又?，然后再加壓用淋洗?走柱子"，本法zui大的優(yōu)點是一般柱子裝的比較結(jié)實，沒有氣泡。   
    干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)，至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，zui后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結(jié)實。接著是用淋洗劑"走柱子"，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。
    濕法裝柱和干法裝柱這二者各有優(yōu)劣，不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。為了獲得*的填充密度，可選擇適當?shù)募訅骸p壓或是手工填充的方法進行填充色譜柱。