豬胚胎睪丸傳代細胞；ST培養(yǎng)

細胞名稱  豬胚胎睪丸傳代細胞；ST培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞樣

品牌 貼壁生長

特征特性 ST細胞系建系于1960年（Mcclurkin,A W,et al）。ST細胞一般用于病毒增殖和分離，是豬細小病毒的理想宿主，可用于這類病毒的分離及增殖。

培養(yǎng)條件 MEM-EBSS：

Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS  

傳代方法 1：

3傳代,2-3天傳一代  

傳代情況 C125

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測
豬胚胎睪丸傳代細胞；ST培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
Anti-CYP11A1/P450SCC/FITC 熒光素標記細胞色素P450 11A1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-LIX1/FITC 熒光素標記LIX1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CASKIN2 皮膚相互作用蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml

ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1) 外胚層發(fā)育不良抗原 0.5mg

HBQ1 英文名稱： 血紅蛋白theta亞型1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh SIGLEC14 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素14抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-LIX1/FITC 熒光素標記LIX1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
KLK 11(Human Kallikrein 11) ELISA Kit 人激肽釋放酶11Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-HCV-NS4a 丙型肝炎病毒-NS4a抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MIF 巨噬細胞移動抑制因子抗體 規(guī)格 0.1ml

LZM(Human Lysozyme) ELISA Kit 人溶菌酶 96T

RIC8A 英文名稱： 膽堿酯酶抑制劑8抗體 0.2ml

CFHL5 英文名稱： 補體因子H相關(guān)蛋白5抗體 0.1ml

Anti-HCV-NS4a 丙型肝炎病毒-NS4a抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rabbit Anti-MK IgM/PE PE標記的兔抗猴IgM 0.1ml

GABPB2 英文名稱： 核呼吸因子2抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh ANKRD12 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Phospho-IRAK1 (Thr209) /FITC 熒光素標記磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格 0.1ml

Anti-Phospho-SATB1 (Ser47)/FITC 熒光素標記磷酸化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Cyclin D2/FITC 熒光素標記周期素D2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-LIF /FITC 熒光素標記兔抗白血病抑制因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體 規(guī)格 0.1ml

E.coli O6 (Escherichia coli O6) E.coli O6大腸桿菌菌體蛋白 0.5mg

HDPTP 英文名稱： His 結(jié)構(gòu)域內(nèi)含酪酸磷酸酶蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh SIRT1/sirtuin 1 沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-LIF /FITC 熒光素標記兔抗白血病抑制因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。