無(wú)需預(yù)孵育!導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑
- 公司名稱 富士膠片和光(廣州)貿(mào)易有限公司
- 品牌 Wako/和光純藥
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2020/9/10 14:35:00
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funakoshi蛋白轉(zhuǎn)染試劑無(wú)需預(yù)孵育導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑
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供貨周期 | 一個(gè)月以上 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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無(wú)需預(yù)孵育!導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑
ProteoCarry <Protein Transfection Reagent>
本產(chǎn)品是將蛋白以及葡聚糖等生物大分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi),尤其是導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)的試劑。傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑存在蛋白滯留在內(nèi)體或溶酶體中的問(wèn)題,但是由于本產(chǎn)品可以高效地將蛋白運(yùn)送至細(xì)胞質(zhì),可以廣泛地適用于在評(píng)價(jià)導(dǎo)入蛋白的細(xì)胞內(nèi)功能和抗體導(dǎo)入引起的功能抑制誘導(dǎo)等的實(shí)驗(yàn)。另外與傳統(tǒng)產(chǎn)品不同的是,本品無(wú)需與蛋白進(jìn)行預(yù)孵育,所以不會(huì)形成復(fù)合體,低限度地限制其對(duì)蛋白功能的影響。
※本產(chǎn)品僅供研究,研究以外請(qǐng)勿使用。
◆蛋白轉(zhuǎn)染試劑及其問(wèn)題
蛋白轉(zhuǎn)染試劑(Proteofection試劑)是將重組蛋白和抗體直接導(dǎo)入細(xì)胞的工具。與將質(zhì)粒導(dǎo)入以誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白的方法相比,可以更迅速地導(dǎo)入目的蛋白,因而受到了廣泛地關(guān)注。
雖然已經(jīng)開發(fā)了許多基于肽、陽(yáng)離子的脂質(zhì)或聚合物的蛋白轉(zhuǎn)染試劑,但它們都是與蛋白形成復(fù)合物后,通過(guò)胞吞作用攝入細(xì)胞內(nèi),破壞內(nèi)體膜將其運(yùn)送至細(xì)胞質(zhì)。然而,現(xiàn)有的大部分試劑內(nèi)體膜的破壞活性低,并且從內(nèi)體逃脫不足,導(dǎo)入的蛋白大部分都轉(zhuǎn)移至溶酶體降解系統(tǒng)。本產(chǎn)品是一種新型肽蛋白轉(zhuǎn)染試劑,克服了傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑的缺點(diǎn),通過(guò)強(qiáng)有力的內(nèi)體膜選擇性破壞活性,高效地向細(xì)胞質(zhì)運(yùn)送蛋白,使轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮活性。另外,與傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑不同,本品無(wú)需與蛋白的復(fù)合物,不僅僅是蛋白,還可以向細(xì)胞質(zhì)導(dǎo)入生物大分子(葡聚糖等)。
圖1. 細(xì)胞導(dǎo)入原理的比較
圖2是導(dǎo)入熒光標(biāo)記IgG的案例。不添加轉(zhuǎn)染試劑時(shí),以內(nèi)體/溶酶體的染色為主,從細(xì)胞質(zhì)中無(wú)法獲得熒光信號(hào),與之相對(duì)的,可以觀察到在本產(chǎn)品案例中,內(nèi)體、細(xì)胞質(zhì)被大面積染色。(詳情請(qǐng)參照應(yīng)用實(shí)例)
圖2. 向HeLa細(xì)胞導(dǎo)入熒光標(biāo)記IgG的比較
◆特點(diǎn)
● 基于肽特性的蛋白轉(zhuǎn)染試劑,顯示出高度水溶性。
● 優(yōu)異的內(nèi)體膜破壞活性,與傳統(tǒng)方法相比顯示出高細(xì)胞質(zhì)傳達(dá)性。
● 無(wú)需與導(dǎo)入物質(zhì)進(jìn)行預(yù)孵育,可以簡(jiǎn)便且迅速地轉(zhuǎn)染。
● 由于不會(huì)與蛋白形成復(fù)合物,所以需要添加濃度較高的蛋白,但是可以低限度地抑制對(duì)蛋白功能的影響。
● 只需要1小時(shí)的處理就可以充分地轉(zhuǎn)染至細(xì)胞質(zhì)。
● 有無(wú)血清(<10% FBS)不會(huì)影響導(dǎo)入效率,可以根據(jù)想要使用的細(xì)胞設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。
● 已有向細(xì)胞質(zhì)導(dǎo)入各種蛋白及生物大分子的應(yīng)用實(shí)例。
● 例:IgG抗體、功能性蛋白(Cre recombinase, Saponin)、多糖(葡聚糖)
● 推薦使用濃度幾乎沒(méi)有細(xì)胞毒性。
◆使用方法概述
1. 向新鮮的培養(yǎng)基(無(wú)血清培養(yǎng)基,10%以下含F(xiàn)BS培養(yǎng)基或PBS)添加本產(chǎn)品以及想要導(dǎo)入的蛋白。
1. (配制轉(zhuǎn)染混合液)。
1. ※無(wú)需預(yù)孵育
2. 用PBS清洗2次細(xì)胞(80%以下的融合狀態(tài))后,向細(xì)胞添加轉(zhuǎn)染混合液。
3. 在轉(zhuǎn)染混合液中培養(yǎng)細(xì)胞(~1h)
4. 用PBS清洗2次細(xì)胞后,添加新鮮的培養(yǎng)基。
5. 實(shí)現(xiàn)各項(xiàng)應(yīng)用。
◆試劑盒組成
● ProteoCarry(4 mg)
● FITC-dextran(2 mg,陽(yáng)性對(duì)照用)
實(shí)驗(yàn)次數(shù)的預(yù)測(cè)
孔板的尺寸 | ProteoCarry | FITC-dextran |
6 well | 14 assays | 5 assays |
12 well | 28 assays | 10 assays |
24 well | 56 assays | 20 assays |
48 well | 140 assays | 50 assays |
96 well | 280 assays | 100 assays |
◆有導(dǎo)入數(shù)據(jù)的細(xì)胞
HeLa, SW280, COS7, NIH3T3, HUVEC
參考導(dǎo)入量
導(dǎo)入物 | 推薦培養(yǎng)基的終濃度 | |
抗體 | 50~250 μg/mL | |
蛋白 | Saponin | 1~10 μg/mL |
Cre recombinase | 10~100 μg/mL | |
FITC-dextran | 200 μg/mL |
※導(dǎo)入效率根據(jù)細(xì)胞類型,細(xì)胞數(shù)量和蛋白類型各種因素改變。以上數(shù)據(jù)僅供參考,建議每次實(shí)驗(yàn)都要優(yōu)化數(shù)據(jù)。
◆應(yīng)用實(shí)例
1. 向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入FITC-dextran
向HeLa細(xì)胞導(dǎo)入FITC-Dextran(培養(yǎng)基的終濃度為200 μg/mL),僅向細(xì)胞添加FITC-Dextran時(shí),(Reagent(-))觀察到點(diǎn)狀的熒光信號(hào),細(xì)胞質(zhì)中幾乎沒(méi)有觀察到信號(hào);相反,使用本產(chǎn)品時(shí)擴(kuò)散到了整個(gè)細(xì)胞質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)概要:
向HeLa細(xì)胞(80% confluent)添加200 μg/mL FITC-dextran, 1×ProteoCarry in α-MEM,并培養(yǎng)1個(gè)小時(shí)。用PBS清洗細(xì)胞后,進(jìn)行核染色(Hoechst)。
2. 向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入熒光標(biāo)記IgG
向HeLa細(xì)胞導(dǎo)入熒光標(biāo)記IgG抗體(培養(yǎng)基終濃度為250 μg/mL),僅有抗體添加至細(xì)胞時(shí),可以觀察到胞吞作用自發(fā)性攝入點(diǎn)狀的熒光信號(hào),表明抗體停留在內(nèi)體和溶酶體中。另一方面,使用本產(chǎn)品時(shí),不僅能觀察到點(diǎn)狀的內(nèi)體結(jié)構(gòu),還可以觀察到它主要在細(xì)胞質(zhì)中廣泛擴(kuò)散。
※用熒光信號(hào)觀察細(xì)胞擴(kuò)散時(shí),與內(nèi)體相比,由于細(xì)胞質(zhì)的體積較大,信號(hào)會(huì)被稀釋。細(xì)胞質(zhì)信號(hào)的檢測(cè)需要添加高濃度的熒光標(biāo)記蛋白,在本數(shù)據(jù)中添加了250 μg/mL的熒光標(biāo)記IgG。
實(shí)驗(yàn)概要:
向HeLa細(xì)胞(80% confluent)添加250 μg/mL熒光標(biāo)記IgG,1×ProteoCarry in α-MEM并培養(yǎng)1小時(shí)。用PBS清洗細(xì)胞后,進(jìn)行核染色(Hoechst)。
3. 向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入Cre recombinase
將設(shè)計(jì)為Cre recombinase不存在時(shí)表達(dá)DsRed,只有在Cre recombinase存在時(shí)發(fā)生重組表達(dá)GFP的質(zhì)粒向HeLa細(xì)胞導(dǎo)入基因。相對(duì)于導(dǎo)入第二天就表達(dá)DsRed的HeLa細(xì)胞,使用本產(chǎn)品導(dǎo)入Cre recombinase(培養(yǎng)基終濃度為10 μM),依賴導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的Cre recombinase表達(dá)GFP,本產(chǎn)品在維持Cre recombinase的功能下將其導(dǎo)入了細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)概要:
向HeLa細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的第二天,向HeLa細(xì)胞添加10 μM Cre recombinase, 1×ProteoCarry in α-MEM,并培養(yǎng)1小時(shí)。用PBS清洗細(xì)胞后,用新的培養(yǎng)基再培養(yǎng)24小時(shí)。
◆保存
● 運(yùn)輸:室溫
● 保存:-20℃
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
FDV-0015 | ProteoCarry<Protein Transfection Reagent> ProteoCarry <蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑> | 1 set |