FC-121-1030 illumina Nextera DNA文庫制備試劑盒

產(chǎn)品名稱：Nextera DNA Library Prep Kit (24 samples)

（附推廣：Service（服務(wù)類）相關(guān)產(chǎn)品，如有需求，請在推文中查詢；更多產(chǎn)品，歡迎咨詢）

產(chǎn)品貨號：FC-121-1030

（對于全基因組測序，Nextera DNA Flex文庫制備試劑盒是Nextera DNA文庫制備試劑盒的推薦替代品，該試劑盒已停產(chǎn)。如果您使用的是用于ATAC-Seq或其他定制應(yīng)用的Nextera DNA文庫制備試劑盒，歡迎你的咨詢）

產(chǎn)品賣點：

較快較簡單的文庫制備流程。制備全基因組測序文庫不到90分鐘，而手工操作不到15分鐘。
借助Nextera技術(shù)，在一個步驟中利用轉(zhuǎn)座酶將DNA同時片段化并加上測序接頭進行標(biāo)記。此操作流程適用于數(shù)量有限的珍貴樣本，只需要50 ng的起始DNA。

這款試劑盒提供較快較簡單的操作流程，90分鐘就可以構(gòu)建好上及測序的文庫，手動操作的時間少于15分鐘。一步即可完成片段打碎和連接接頭的步驟，不需要特殊設(shè)備，實驗室的常規(guī)設(shè)備即可完成整個文庫構(gòu)建。并且建好的文庫可以適用于illumina的任何測序平臺。

采用Nextera技術(shù)，一步即可完成片段打碎和連接接頭的步驟，不需要特殊設(shè)備，實驗室的常規(guī)設(shè)備即可完成整個文庫構(gòu)建。較適合樣本量極其稀少的珍貴樣本進行建庫，這種建庫方法只需要50ng的建庫起始量。并且可以在任何illumina測序設(shè)備上進行測序。

Nextera建庫試劑盒還需要配合使用TruSeq Dual Index Sequencing Primer Box（FC-121-1003單端/PE-121-1003雙端），不論是單端測序還是雙端測序，不論是否有index，還是單端或雙端index，這個試劑盒都是必須的。

另外 Nextera Index kit (FC-121-1011 or FC-121-1012)對于Nextera文庫構(gòu)建也是必需的。不論是混合多少樣本在一個pooling中。

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紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司

產(chǎn)品名稱：illumina Nextera DNA文庫制備試劑盒 (24 samples)         產(chǎn)品貨號：FC-121-1030

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DNA文庫制備試劑盒類：

品牌                產(chǎn)品貨號          產(chǎn)品名稱

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illumina品牌        20024895          AmpliSeq for Illumina DNA Library Preparation - Illumina Solutions Centre文庫制備試劑盒

illumina品牌        20023392          AmpliSeq for Illumina®  DNA Library Preparation Kit Training文庫制備試劑盒

Illumina二代測序技術(shù)，邊合成邊測序（SBS），是廣泛采用的新一代測序（NGS）技術(shù)，負責(zé)產(chǎn)生世界上90％以上的測序數(shù)據(jù)。

Illumina的二代測序技術(shù)稱為邊合成邊測序(Sequencing-by-Synthesis,簡稱SBS)。SBS主要包括堿基延伸、熒光激發(fā)及信號收集、剪切等3個步驟。這3個步驟可以重復(fù)，循環(huán)進行。每循環(huán)一次測定一個堿基。想測定多少個堿基（即讀長），就循環(huán)多少次。測序循環(huán)次數(shù)可以在軟件里設(shè)定。到底測序多長合適，要根據(jù)項目性質(zhì)和需求來決定。大多數(shù)情況下，SR實驗（單端測序）測定1x50個堿基，PE實驗（雙端測序）測定2x150個堿基。

1 堿基延伸

Illumina測序試劑里所使用的dNTP特色，它們同時具有兩個修飾基團：一個熒光基團，一個可逆終止基團。A、G、C、T 4種堿基分別標(biāo)記4種不同的熒光基團，它們在不同波長的激光激發(fā)下，能夠發(fā)射不同波長（即顏色）的熒光。熒光顏色與堿基種類一一對應(yīng)，因此根據(jù)激發(fā)光的波長可以識別堿基。4種堿基的終止基團是一樣的。由于終止基團的存在，所有dNTP每次都只能延伸1個堿基，無論給予多長的反應(yīng)時間。又由于該終止基團是可逆的，在熒光信號收集完畢之后，可以用剪切劑切除該終止基團，使堿基恢復(fù)自然的可延伸狀態(tài)，這時即可繼續(xù)進行下一輪循環(huán)，再測定一個堿基。

可逆終止基團技術(shù)是Illumina二代測序的一大特色。它與橋式PCR技術(shù)一起，構(gòu)成了Illumina二代測序的兩大支柱，為穩(wěn)定獲得高質(zhì)量的測序數(shù)據(jù)打下了堅實的基礎(chǔ)。

2 信號采集

HiSeq系列測序儀具有紅綠兩根激光管，兩個濾色片。它們兩兩組合，可以形成4種不同的激發(fā)波長，正好分別用于激發(fā)A、G、C、T 4種堿基。

Cluster上所標(biāo)記的熒光基團在激光激發(fā)下產(chǎn)生的信號，可以用相機拍攝或者掃描的方式收集信號。掃描技術(shù)速度比較快，被X10系列采用。由于FC面積比較大，而且上表面和下表面要分別拍照，所以拍照過程相當(dāng)耗時。對于經(jīng)典的HiSeq 2000來說，一次測序循環(huán)所產(chǎn)生的熒光信號，需要大約40分鐘的時間才能拍照收集完畢，時間比測序反應(yīng)本身還要長。

3 剪切

熒光信號收集完畢后，關(guān)閉激光，用剪切劑去除測序引物的延伸產(chǎn)物上的堿基所標(biāo)記的熒光基團和終止基團。兩個修飾基團均被切除，一方面消去干擾熒光，一方面使鏈末端的堿基回復(fù)到自然的可延伸狀態(tài)，為下一輪測序做好準(zhǔn)備。

再重復(fù)合成、激發(fā)、收集等步驟，即可進行第二個堿基的測序。

測序循環(huán)可以重復(fù)多次。理論上可以一直重復(fù)，直到信噪比降低得無法有效識別堿基信號為止。由于熒光基團的發(fā)光效率持續(xù)不斷在衰減，Taq酶的活性也在持續(xù)不斷地衰減，所以實際上測序循環(huán)次數(shù)是有限的，大重復(fù)次數(shù)與sbs試劑的配方有關(guān)。測序的循環(huán)次數(shù)可以在軟件設(shè)置過程中人為，這個重復(fù)次數(shù)就是每個測序片段的讀長。目前，Illumina平臺的讀長有2x100 bp，2x125 bp，2x150 bp，2x300 bp等多種，其中2x150 bp用得較廣泛。

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品牌                      產(chǎn)品貨號                    產(chǎn)品名稱

illumina品牌          15071960                 Harness, Rear Service Door Sensor

illumina品牌          20001098                 Infinium® Multi-Ethnic AMR/AFR-8 v1.0 FastTrack Service

illumina品牌          20001108                 Infinium® Multi-Ethnic EUR/EAS/SAS-8 v1.0 FastTrack Service

illumina品牌          20001110                 Infinium Multi-Ethnic Global-8 v1.0 FastTrack Service

illumina品牌          20001111                 Infinium Multi-Ethnic Global-8+ v1.0 FastTrack Service

illumina品牌          20001120                 Infinium Omni2.5-8 v1.3 FastTrack Service

illumina品牌          20001128                 Infinium® OmniExpress-24 v1.2 FastTrack Service

illumina品牌          20004345                 Infinium OmniZhongHua-8 v1.3 FastTrack Service

illumina品牌          20004426                 ILMN-Assisted FGx Validation Service

illumina品牌          20004427                 ILMN Full Standard FGx Validation Service

illumina品牌          20004428                 ILMN Custom FGx Validation Service-Add'l 32 Smp

illumina品牌          20004429                 ILMN Custom FGx Validation Service-Add'l 64 Smp

illumina品牌          20004482                 Infinium Omni5-4 v1.2 FastTrack Service

illumina品牌      SP-201-1007          NeoPrep? Calibration Service

illumina品牌      SR-50-705001-00     BlueGnome professional service (Local)

illumina品牌      SR-50-705002-00     BlueGnome professional services (Regional)

illumina品牌      SR-50-705003-00     BlueGnome professional services (ROW)

illumina品牌      SV-475-1001         Illumina High-Throughput Sequencing Consulting Service

illumina品牌      SV-500-1001         Service Parts and Labor Estimate

illumina品牌      SV-800-1000         Service Contract Upgrade

illumina品牌      TR-203-0021          Instrument Field Service Training

illumina品牌      TR-203-0022          Instrument Field Service Training Recertification

單端測序：單端測序(Single-read)首先將DNA樣本進行片段化處理形成200-500bp的片段，引物序列連接到DNA片段的一端，然后末端加上接頭，將片段固定在flow cell上生成DNA簇，上機測序單端讀取序列。

雙端測序：雙端測序(Paired-end)方法是指在構(gòu)建待測DNA文庫時在兩端的接頭上都加上測序引物結(jié)合位點，在*輪測序完成后，去除*輪測序的模板鏈，用對讀測序模塊(Paired-End Module)引導(dǎo)互補鏈在原位置再生和擴增，以達到第二輪測序所用的模板量，進行第二輪互補鏈的合成測序。

基因測序是一種新型基因檢測技術(shù)，能夠從血液或唾液中分析測定基因全序列，預(yù)測罹患多種疾病的可能性，個體的行為特征及行為合理。基因測序技術(shù)能鎖定個人病變基因，提前預(yù)防和治療。

基因測序相關(guān)產(chǎn)品和技術(shù)已由實驗室研究演變到臨床使用，可以說基因測序技術(shù)，是下一個改變世界的技術(shù) 。

基因測序只是基因檢測的方法之一，其又叫基因譜測序，是上*的一種基因檢測標(biāo)準(zhǔn)。

基因測序廣為人知的還有針對唐氏綜合征篩查的無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測。只需要采集孕婦的外周血，通過對血液中游離DNA(包括胎兒游離DNA)進行測序，并將測序結(jié)果進行生物學(xué)分析，從而得出胎兒是否患有染色體數(shù)目異常的疾病，包括常見的21-三體綜合征(唐氏綜合征)、18-三體綜合征(愛德華氏綜合征)和13-三體綜合征(Patau綜合征)。

基因組文庫是指將某生物的全部基因組DNA切割成一定長度的DNA 片段克隆到某種載體上而形成的集合?；蚪M文庫根據(jù)DNA 來源又分為核基因組文庫、葉綠體基因組文庫及線粒體基因組文庫?；蚪M文庫構(gòu)建時遺傳信息供體是基因組DNA,因而無發(fā)育時期及組織器官特異性，在一個*的基因組文庫中包含著基因組DNA 上的所有編碼區(qū)及非編碼區(qū)序列的克隆; 生物有機體的每一個基因在文庫中都有其克隆，該克隆的基因片段里包括著間隔序列，所以基因組文庫可真實地顯示基因組的全部結(jié)構(gòu)信息。

基因組文庫(Genomic Library)定義:把某種生物基因組的全部遺傳信息通過克隆載體貯存在一個受體菌克隆子群體中，這個群體即為這種生物的基因組文庫。

cDNA文庫：以mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)?shù)妮d體(常用噬菌體或質(zhì)粒載體)連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個細菌含有一段cDNA，并能繁殖擴增，這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細胞的cDNA文庫。cDNA文庫特異地反映某種組織或細胞中，在特定發(fā)育階段表達的蛋白質(zhì)的編碼基因，因此cDNA文庫具有組織或細胞特異性。

cDNA文庫是以特定的組織或細胞mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄形成的互補DNA(cDNA)與適當(dāng)?shù)妮d體(常用噬菌體或質(zhì)粒載體)連接后轉(zhuǎn)化受體菌形成重組DNA克隆群，這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織或細胞的cDNA文庫。cDNA文庫特異地反映某種組織或細胞中，在特定發(fā)育階段表達的蛋白質(zhì)的編碼基因，因此cDNA文庫具有組織或細胞特異性。

cDNA文庫顯然比基因組DNA文庫小得多，能夠比較容易從中篩選克隆得到細胞特異表達的基因。但對真核細胞來說，從基因組DNA文庫獲得的基因與從cDNA文庫獲得的不同，基因組DNA文庫所含的是帶有內(nèi)含子和外顯子的基因組基因，而從cDNA文庫中獲得的是已經(jīng)過剪接、去除了內(nèi)含子的cDNA。

真核生物基因組DNA十分龐大,其復(fù)雜程度是蛋白質(zhì)和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重復(fù)序列. 采用電泳分離和雜交的方法,都難以直接分離到目的基因.這是從染色體DNA為出發(fā)材料直接克隆目的基因的一個主要困難。

高等生物一般具有10^5種左右不同的基因,但在一定時間階段的單個細胞或個體中,都僅有15%左右的基因得以表達,產(chǎn)生約15000種不同的mRNA分子.可見,由mRNA出發(fā)的cDNA克隆,其復(fù)雜程度要比直接從基因組克隆簡單得多。

cDNA文庫在研究具體某類特定細胞中基因組的表達狀態(tài)及表達基因的功能鑒定方便具有特殊的優(yōu)勢，從而使它在個體發(fā)育、細胞分化、細胞周期調(diào)控、細胞衰老和死亡調(diào)控等生命現(xiàn)象的研究中具有更為廣泛的應(yīng)用價值，是研究工作中較常使用到的基因文庫。

產(chǎn)品名稱：illumina Nextera DNA文庫制備試劑盒 (24 samples)         產(chǎn)品貨號：FC-121-1030

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