AML12 AML12 小鼠肝細胞/鏡像綺點（iCell）

AML12 小鼠肝細胞/鏡像綺點（iCell）介紹
AML12細胞從一只轉(zhuǎn)入人TGF alpha的轉(zhuǎn)基因小鼠肝實質(zhì)細胞獲得。該細胞表達較高水平的人TGF alpha 以及較低水平的鼠TGF alpha。肝臟特異性蛋白的表達隨著培養(yǎng)時間的延長而降低，但是可在無血清培養(yǎng)基中重新激活。

細胞特性
1）來源：小鼠肝臟
2）形態(tài)：上皮細胞樣
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

（1）使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。

（2）收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

AML12 小鼠肝細胞/鏡像綺點（iCell）用途：僅供科研使用。
                       
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備DMEM： Ham's F12(1：1)培養(yǎng)基(添加0.005 mg/ml 牛胰島素, 0.005 mg/ml 轉(zhuǎn)鐵蛋白, 5 ng/ml 硒, 以及 40 ng/ml 地塞米松)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一、原代細胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實驗外包服務(wù)

        二、細胞系服務(wù)：
               細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)
               細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等

        三、iPS細胞服務(wù)：
               iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習(xí)
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等

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