FluoroCore/Ultra/Universl CTL酶聯(lián)斑點分析儀

 ELISPOT全名為Enzyme-linked Immunospot Assay，其技術(shù)原理與ELISA相似。其實驗設(shè)計是在96微孔培養(yǎng)盤底部披覆PVDF薄膜，用來吸附特殊挑選、且無毒性（不含內(nèi)毒素）的單克隆抗體。靜脈血PBMC細(xì)胞經(jīng)適當(dāng)分離處理后，會被分配到微孔盤上，再接受適當(dāng)?shù)目乖碳ぃ⑽⒖妆P放置于溫箱中過夜培養(yǎng)一段時間。一般而言，記憶型T細(xì)胞在受抗原刺激數(shù)小時后會開始分泌細(xì)胞因子，此時局部(在緊靠分泌細(xì)胞的周圍)分泌出的細(xì)胞因子會被PVDF薄膜上特異抗體捕獲。微孔盤中的細(xì)胞被移除并清洗后，被捕獲的細(xì)胞因子可進(jìn)一步使用生物素（Biotin）標(biāo)記的二次抗體來標(biāo)志，其后再以結(jié)合堿性磷酸酶的生物素，BCIP/NBT 底物孵育后， PVDF 孔板出現(xiàn)“紫色”的斑點表明細(xì)胞產(chǎn)生了細(xì)胞因子。每個斑點代表每個分泌待測因子的細(xì)胞，斑點的多少可以在ELISPOT分析儀上進(jìn)行自動化技術(shù)或在顯微鏡下進(jìn)行人工計數(shù)。統(tǒng)計膜上斑點的數(shù)目，除以當(dāng)初加入孔中的細(xì)胞數(shù)目，可以算出陽性細(xì)胞的頻率。