噬菌體展示抗體文庫服務(wù)
- 公司名稱 安諾倫（北京）生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2020/5/9 15:02:32
- 訪問次數(shù) 2028
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| 供貨周期 | 一個月以上 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
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噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺
M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫展示系統(tǒng)，通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達(dá)，使之參與噬菌體組裝，并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫，針對特定靶分子進(jìn)行3-5輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體，得到相應(yīng)的 DNA序列信息。
艾柏森生物目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個性化文庫，并提供靈活高效的篩選服務(wù)。
噬菌體展示服務(wù)簡介
M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫展示系統(tǒng)，通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達(dá)，使之參與噬菌體組裝，并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫，針對特定靶分子進(jìn)行3-5輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體，得到相應(yīng)的 DNA序列信息。
艾柏森生物目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個性化文庫，并提供靈活高效的篩選服務(wù)。
艾柏森生物平臺系統(tǒng)主要包括pComb3噬菌體展示系統(tǒng)和pCANTAB5e噬菌體展示系統(tǒng):
★ pComb3噬菌體展示技術(shù)流程
1> 抗體基因庫的獲得：收集目標(biāo)抗體宿主的免疫細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA；反轉(zhuǎn)錄后，使用多對引物分別擴(kuò)增VH-CH1抗體基因片段和VL-CL1抗體基因片段；
2> 抗體基因庫轉(zhuǎn)化大腸桿菌：將以上擴(kuò)增的抗體基因庫連接至pComb3質(zhì)粒，隨后電轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL12 Blue；同時鑒定基因庫庫容（及抗體基因的插入率）；
3> 噬菌體Fab抗體庫的構(gòu)建：將輔助噬菌體VCSM13加入到轉(zhuǎn)入了抗體基因的，生長至對數(shù)生長期的大腸桿菌中進(jìn)行噬菌粒拯救；培養(yǎng)過夜后，離心收集上清即獲得噬菌體Fab抗體庫；
4> 抗體庫的滴度測定：取少量上述獲得的噬菌體Fab抗體庫，梯度稀釋后進(jìn)行噬斑培養(yǎng)實驗，觀察噬斑生長情況以判斷噬菌體Fab抗體庫的滴度；
5> 噬菌體抗體庫的富集篩選：使用靶標(biāo)抗原包被酶聯(lián)板，加入噬菌體抗體進(jìn)行孵育，隨后進(jìn)行洗板、洗脫；將洗脫下來的噬菌體抗體進(jìn)行中和后，再次感染細(xì)菌，并進(jìn)行第二輪的淘洗；共進(jìn)行3輪淘洗，每一輪洗脫后都進(jìn)行滴度測定；后一輪篩選時，設(shè)BSA包被的對照組以確定是否富集了大量抗BSA的噬菌體抗體。
圖1 pComb3噬菌體展示技術(shù)流程
圖2 噬菌粒載體pComb3遺傳圖譜
圖3 輔助噬菌體VCSM13遺傳圖譜
★ pCANTAB5e噬菌體展示技術(shù)流程
1> ScFv基因庫的獲得：收集目標(biāo)抗體宿主的免疫細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA；反轉(zhuǎn)錄后，使用多對引物分別擴(kuò)增抗體基因VH和VL，純化回收VH和VL片段后，使用Linker引物將全套VH和VL基因隨機(jī)拼接成ScFv基因庫；
2> ScFv基因庫轉(zhuǎn)化大腸桿菌：將全套 ScFv 基因片段連接至pCANTAB5e載體，隨后電轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1；同時鑒定ScFv基因庫庫容（及基因的插入率）；
3> 噬菌體ScFv抗體庫的構(gòu)建：將輔助噬菌體M13K07加入到轉(zhuǎn)入了ScFv抗體基因的，生長至對數(shù)生長期的大腸桿菌中進(jìn)行噬菌粒拯救；培養(yǎng)過夜后，離心收集上清即獲得噬菌體ScFv抗體庫；
4> 抗體庫的滴度測定：取少量上述獲得的噬菌體ScFv抗體庫，梯度稀釋后進(jìn)行噬斑培養(yǎng)實驗，觀察噬斑生長情況以判斷噬菌體ScFv抗體庫的滴度；
5> 噬菌體抗體庫的富集篩選：使用靶標(biāo)抗原包被酶聯(lián)板，加入噬菌體抗體進(jìn)行孵育，隨后進(jìn)行洗板、洗脫；將洗脫下來的噬菌體抗體進(jìn)行中和后，再次感染細(xì)菌，并進(jìn)行第二輪的淘洗；共進(jìn)行3輪淘洗，每一輪洗脫后都進(jìn)行滴度測定；后一輪篩選時，設(shè)BSA包被的對照組以確定是否富集了大量抗BSA的噬菌體抗體。
圖1 pCANTAB5e噬菌體展示技術(shù)流程
圖2 噬菌粒載體pCANTAB5e遺傳圖譜
圖3 輔助噬菌體M13K07遺傳圖譜
噬菌體展示技術(shù)服務(wù)項目
表1 噬菌體展示技術(shù)服務(wù)項目：噬菌體展示抗體庫構(gòu)建
服務(wù)描述 | 服務(wù)周期 | 價格 | |
cDNA 合成 | 免疫細(xì)胞收集，總RNA提取，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。 | 1周 | ¥98000 |
質(zhì)粒構(gòu)建 | 以以上cDNA為模板, PCR擴(kuò)增抗體基因片段，并連接至載體 (例如：pComb3或pCANTAB5e載體) 。 | 4周 | |
轉(zhuǎn)化 | 將已構(gòu)建好的載體電轉(zhuǎn)化至大腸桿菌菌株。 | 1周 | |
庫容鑒定 | (1)以上轉(zhuǎn)化菌株復(fù)蘇后，梯度稀釋，并涂布平板，計算陽性克隆數(shù)； (2)挑選10個陽性單克隆，提取質(zhì)粒后，進(jìn)行酶切驗證; (3)通過陽性克隆數(shù)和酶切驗證的結(jié)果，計算抗體庫庫容。 | ||
抗體庫生產(chǎn) | 通過輔助噬菌粒拯救獲得噬菌體展示抗體庫。 | 1周 | |
運輸 | 低溫（干冰）運輸。 | N/A | 免費 |
總計： | 2-3月 | ¥98000 | |
注：項目啟動后，客戶需支付80%的預(yù)付款。
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