人丙酮酸脫氫酶E1試劑盒

人丙酮酸脫氫酶E1試劑盒

人丙酮酸脫氫酶E1試劑盒，是科研領域用于檢測人體樣本中該酶相關指標的重要工具，在疾病研究、代謝機制探索等方面發(fā)揮關鍵作用 。

• 類型及原理

• ELISA 試劑盒：應用雙抗體夾心法，以純化的人丙酮酸脫氫酶 E1 抗體包被微孔板作為固相抗體。加入樣本中的丙酮酸脫氫酶 E1，再與 HRP 標記的丙酮酸脫氫酶 E1 抗體結(jié)合，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。che底洗滌后加底物 TMB 顯色，TMB 在 HRP 酶催化下轉(zhuǎn)化為藍色，在酸作用下變?yōu)辄S色，顏色深淺與樣品中丙酮酸脫氫酶 E1 含量正相關。通過酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值），依據(jù)標準曲線計算樣品濃度 。

• 免疫組化試劑盒：以 HRP 標記的鏈霉親和素復合物（HRP - SA）為基礎。一抗與相應靶抗原結(jié)合后，生wu素化二抗與一抗特異性結(jié)合，最后加入 HRP - SA，形成抗原 — 特異一抗 — 生wu素化二抗 —HRP - SA 復合物，可在顯微鏡下對細胞、組織內(nèi)的丙酮酸脫氫酶 E1 進行定性定位檢測，呈現(xiàn)出其在組織細胞中的分布情況 。

• 酶活性檢測試劑盒：利用丙酮酸脫氫酶 E1 對特定底物的催化反應，通過檢測反應過程中產(chǎn)物生成量（如以丙酮酸為底物生成的乙酰輔/酶 A 量）或底物消耗量，來精準反映酶活性高低，助力研究該酶在代謝通路中的功能 。

• 化學發(fā)光免疫分析試劑盒：將化學發(fā)光物質(zhì)標記在抗體或抗原上，當與樣本中的丙酮酸脫氫酶 E1 特異性結(jié)合后，引發(fā)化學發(fā)光反應產(chǎn)生光信號，且光信號強度與樣本中丙酮酸脫氫酶 E1 含量成正比，從而實現(xiàn)高靈敏度、寬范圍的定量檢測 。

• 樣本處理

• 血清：操作時避免細胞刺激，使用無熱原和內(nèi)毒素試管。血液收集后，以 1000×g 離心 15 分鐘，迅速小心分離血紅細胞 。

• 血漿：可用 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等抗凝。采集后 1000×g 離心 60 分鐘，去除顆粒 。

• 細胞上清液：1000×g 離心 32 分鐘，去除顆粒和聚合物 。

• 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎，1000×g 離心 33 分鐘，取上清液用于后續(xù)檢測 。

• 操作流程

• 加樣與孵育：將處理后的樣本或標準品加入包被抗體的酶標板孔，在 37℃等特定溫度孵育，使抗原與包被抗體充分結(jié)合 。

• 洗滌：孵育結(jié)束棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液多次洗板，去除未結(jié)合物質(zhì)，降低非特異性干擾 。

• 加酶標抗體與顯色：加入酶標抗體繼續(xù)孵育，使其與固相載體上的抗原結(jié)合，之后加入底物溶液，在酶催化下底物顯色 。

• 終止反應與讀數(shù)：加入終止液終止反應，用酶標儀在特定波長測定各孔吸光度值，對照標準曲線得出樣本中丙酮酸脫氫酶 E1 的含量或活性 。

• 注意事項

• 試劑盒保存：通常需 2 - 8℃低溫保存，防止反復凍融，保質(zhì)期一般為 6 個月左右，使用前檢查是否在有效期內(nèi) 。

• 樣本質(zhì)量：采集樣本時避免溶血、脂血等情況，嚴格按說明書處理和保存樣本，保障檢測結(jié)果準確 。

• 操作規(guī)范：嚴格遵循試劑盒說明書步驟操作，精確控制加樣量、孵育時間、洗滌次數(shù)等關鍵參數(shù)，避免操作失誤影響結(jié)果 。