電轉(zhuǎn)儀celetrix

電轉(zhuǎn)儀celetrix

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染（電轉(zhuǎn)），也叫細(xì)胞電穿孔(electroporation), 是把外源大分子物質(zhì)DNA、 RNA、 siRNA、 蛋白質(zhì)以及一些小分子等導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)部的重要方法。

在瞬間強(qiáng)大電場的作用下，溶液中細(xì)胞的細(xì)胞膜具有了一定的通透性，帶電的外源物質(zhì)以類似電泳的方式進(jìn)入細(xì)胞膜。 由于細(xì)胞膜磷脂雙分子層的電阻很大，細(xì)胞外部電流場產(chǎn)生的細(xì)胞兩極電壓都被細(xì)胞膜承受，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到的電壓可以忽略不計(jì)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部幾乎沒有電流，因此也決定了正常范圍內(nèi)的電轉(zhuǎn)過程中細(xì)胞毒性很小。 電場使DNA等物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞膜后只能停止在細(xì)胞膜附近，隨后細(xì)胞本身的機(jī)制可以允許這些物質(zhì)到細(xì)胞核等處。

普通電轉(zhuǎn)能量過高可導(dǎo)致部分細(xì)胞因膜破壞而死亡，其中能存活下來的細(xì)胞內(nèi)部都不會受到電流影響，因?yàn)榧?xì)胞膜完整是細(xì)胞存活的必要條件。

由千電轉(zhuǎn)技術(shù)依靠的是物理方法，細(xì)胞表面的分子特性對電轉(zhuǎn)影響比較小。 相比化學(xué)轉(zhuǎn)染方法和病毒載體轉(zhuǎn)染方法，電轉(zhuǎn)可以用在所有的細(xì) 胞種類上，而且容易定量控制。

以及相關(guān)的電擊管與電轉(zhuǎn)液綜合優(yōu)化了儀器電學(xué)特性、 電擊管內(nèi)的電場均勻度以及電轉(zhuǎn)液的細(xì)胞保護(hù)作用，是獲得高效、 低毒性細(xì)胞電轉(zhuǎn)的解決方案。

celetrix電轉(zhuǎn)儀應(yīng)用：

•     有效的細(xì)胞：幾乎所有的真核細(xì)胞，包括所有細(xì)胞系，原代細(xì)胞，干細(xì)胞，血液和免疫類細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，植物細(xì)胞和胚胎。

•     可以電轉(zhuǎn)的物質(zhì)包括DNA、 RNA、 siRNA、 蛋白質(zhì)等。

•     適用實(shí)驗(yàn)：瞬時或穩(wěn)定表達(dá)蛋白質(zhì)、 基因敲除與敲入、 siRNA和其他分子機(jī)制研究。

•     科研領(lǐng)域：細(xì)胞分子生物學(xué)、 免疫學(xué)、 血液學(xué)、 神經(jīng)學(xué)、 癌癥研究、 新藥開發(fā)等。

功能強(qiáng)大   操作簡單

效率高       細(xì)胞死亡率低

適用所有真核細(xì)胞；可以電轉(zhuǎn)DNA、RNA、siRNA、蛋白質(zhì)等；
外觀美觀、界面簡潔、操作簡單。
電脈沖參數(shù)設(shè)定方便，內(nèi)部電路反應(yīng)迅速，設(shè)定完成即可啟動，瞬間完成電轉(zhuǎn)。
示波器功能，顯示實(shí)際通過樣品的電流波形，可視化掌控實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
LED照明燈，清楚指示電擊管連接狀態(tài)。
功率強(qiáng)大，單次高效電轉(zhuǎn)可達(dá)1000ul，可以經(jīng)濟(jì)快速的電轉(zhuǎn)大量細(xì)胞。

全部過程只需5步
1、懸浮細(xì)胞（貼壁細(xì)胞先消化成單細(xì)胞狀態(tài)）1000rpm離心3min。
2、無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗一遍、1000rpm離心1min。
3、重懸細(xì)胞在電轉(zhuǎn)液中，加入DNA，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至電擊管蓋好并放入儀器中。
4、設(shè)定參數(shù)進(jìn)行電擊，大部分細(xì)胞系可以使用30ms單脈沖，只需改變一個電壓參數(shù)。
5、取出細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

技術(shù)參數(shù)

celetrix電轉(zhuǎn)儀應(yīng)用的優(yōu)勢：

Celetrix新一代電轉(zhuǎn)可以高效轉(zhuǎn)染從新鮮PBMC到刺激培養(yǎng)階段的T細(xì)胞。 與其他電轉(zhuǎn)技術(shù)相比， Celetrix電轉(zhuǎn)技術(shù)具有效率。

我們的技術(shù)也具有細(xì)胞存活率，并且細(xì)胞在電轉(zhuǎn)后能夠和未電轉(zhuǎn)細(xì)胞

Celetrix電轉(zhuǎn)儀使得CAR-T, TCR-T制備、 CRISPR介導(dǎo)的基因編輯等變得容易。

目前70%以上的治療性抗體蛋白都是由CHO細(xì)胞產(chǎn)生

的，Celetrix電轉(zhuǎn)技術(shù)對CHO細(xì)胞可以達(dá)到高效穩(wěn)定

(90%以上）的電轉(zhuǎn)效率和80%以上的存活率， 為治療 性抗體細(xì)胞轉(zhuǎn)染領(lǐng)域提供了更加高效、便捷、 穩(wěn)定的轉(zhuǎn) 染方法。

利用Celetrix的電轉(zhuǎn)技術(shù)電轉(zhuǎn)Cas9蛋白和gRNA (+)或者Cas9蛋白，通過T7El核酸內(nèi)切酶檢測基因編輯效率，在APP, AAVSl, OCT4和PDCDl四個基因位點(diǎn)的編輯效率均超過50%, 其中AAVSl基因位點(diǎn)編輯效率能夠達(dá)到70%。

•     電極杯中樣品與電極接觸面積大，電化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生毒性物質(zhì)多，并且產(chǎn)生非常多的氣泡。 氣泡對電轉(zhuǎn)的實(shí)際影響非常大。

•     由千氣泡是絕緣體，電流只能從氣泡之間的間隙溶液流過，這樣導(dǎo)致氣泡間隙的溶液中電流富集升高，處千其中的細(xì)胞因承受太高的電壓而死亡。

電極杯內(nèi)的溶液上方受到液面效應(yīng)影響，電場不均勻。 靠近兩個電極1-2mm的區(qū)域由千氣泡的作用，電場也不均勻。電極杯內(nèi)電場比較均勻的較優(yōu)電轉(zhuǎn)區(qū)域很?。ㄓ覉D藍(lán)色部分），而1mm或者

2mm的電極杯甚至可能沒有較優(yōu)電轉(zhuǎn) 區(qū)域。

液體樣品密封呈規(guī)整圓柱形，沒有液面效應(yīng)影響電場均勻度。

電極與液體接觸面積小，氣泡少又而且被壓縮，不影響電流分配。

電擊管內(nèi)部電場均勻，全部都是有效電轉(zhuǎn) 區(qū)域。