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單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序

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 上海申知心生物科技有限公司(簡稱“申知心生物”),是一家“提供全面、系統(tǒng)、高質(zhì)量的心血管相關(guān)疾病研究服務(wù)平臺”的創(chuàng)新型企業(yè),致力于搭建基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床轉(zhuǎn)化服務(wù)體系并開展基于藥效學(xué)評價(jià)的臨床前CRO服務(wù),提供各種成熟的心血管疾病模式動物。公司投資建立的動物實(shí)驗(yàn)中心,建有清潔級、SPF級動物實(shí)驗(yàn)室,面積約1800平米。為科研院所、臨床科室及醫(yī)藥企業(yè)提供專業(yè)定制化的動物模型、藥物篩選、藥理藥效評價(jià)、安全性評價(jià)、病理分析及分子生物學(xué)檢測等服務(wù)。

 

 申知心生物擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),核心成員來自中科院、復(fù)旦、交大、同濟(jì)等國內(nèi)重點(diǎn)高校及科研機(jī)構(gòu),并與心血管病研究所保持密切合作,能夠提供完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)咨詢與服務(wù)。

 

 

 

 

心血管疾病動物模型,動脈粥樣硬化模型,高血脂癥動物模型,缺血性心臟病動物模型,心肌病動物模型,高血壓動物模型,肺動脈高壓動物模型,心血管模型,心血管相關(guān)原代分離

應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序簡介:10x Genomics 是基于微流控技術(shù)的單細(xì)胞系統(tǒng),可同時(shí)獲得100-800000個(gè)細(xì)胞的表達(dá)信息,實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞群體的劃分與細(xì)胞群體間基因表達(dá)差異的檢測,是腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性、免疫細(xì)胞群體檢測以及胚胎發(fā)育研究的黃金方法。10xGenomics單細(xì)胞應(yīng)用廣泛,可應(yīng)用的細(xì)胞類型有:生殖細(xì)胞,胚胎細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,免疫細(xì)胞,腫瘤細(xì)胞,干細(xì)胞,其他原代細(xì)胞。

 

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序實(shí)驗(yàn)流程

1.1實(shí)驗(yàn)流程圖


 

<strong><strong><strong><strong><strong><strong><strong>單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序</strong></strong></strong></strong></strong></strong></strong>

1.2實(shí)驗(yàn)描述

1) 細(xì)胞質(zhì)檢RNA,用Countess®II Automated Cell Counter對細(xì)胞計(jì)數(shù),將細(xì)胞濃度調(diào)整到理想濃度1×106/mL。

2) 10x 標(biāo)記cDNA的片段,含有barcode信息的凝膠珠子首先與細(xì)胞和酶的混合物結(jié)合,然后被位于微流體'雙十字'連接中的油表面活性劑液滴包裹。液滴非常小,僅能容納一個(gè)凝膠珠子,液滴流到儲液器中被收集后,凝膠珠子溶解釋放引物序列,逆轉(zhuǎn)錄cDNA的片段,并以cDNA 為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。將每個(gè)液滴中含有barcode信息的產(chǎn)物混合,構(gòu)建測序文庫。

3) 建庫,首先利用Biorupter 超聲破碎儀將cDNA 打斷成200~300bp左右的片段,加上測序接頭P5 和測序引物R1 等傳統(tǒng)二代測序的建庫過程,后進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到DNA 文庫。

4) 簇生成和測序,利用Qubit 儀器對文庫進(jìn)行定量,合格的文庫被放置到cBot中進(jìn)行橋式擴(kuò)增,生成簇后利用Hiseq 或者M(jìn)iseq測序儀進(jìn)行測序。原理是每個(gè)循環(huán)都加入A,T,G,C 4 種熒光基團(tuán)標(biāo)記的dNTP,依據(jù)AT、GC 配對,對應(yīng)的dNTP通過1DNA 聚合酶結(jié)合到模板DNA 鏈上,其他未結(jié)合的dNTP被洗脫掉,結(jié)合的位置釋放出熒光信號,被計(jì)算機(jī)捕捉到并進(jìn)行相應(yīng)轉(zhuǎn)換,從而得到該位置的堿基信息。

 

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