H1 人胚胎干細(xì)胞

細(xì)胞名稱：H1

細(xì)胞描述：人胚胎干細(xì)胞，曾用名WA01

形 態(tài)：球形克隆，貼壁生長(zhǎng)

來(lái)源性別：男性

組織：內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

凍存日期/代數(shù)：詳見(jiàn) 凍存管/培養(yǎng)瓶 標(biāo)識(shí)

建議復(fù)蘇培養(yǎng)體系：1 個(gè) T25 培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿

細(xì)胞狀態(tài)：良好

支原體檢測(cè)結(jié)果：陰性

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

STR鑒定結(jié)果：

D5S818 9 11

D13S317 8 11

D7S820 8 12

D16S539 9 13

VWA 15 17

TH01 9.3 13

AMEL X Y

TPOX 8 8

CSF1PO 12 13

2.培養(yǎng)流程

2.1.復(fù)蘇

在開(kāi)始復(fù)蘇前，將所有試管、預(yù)熱后的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿準(zhǔn)備好，已確保盡快完成復(fù)蘇過(guò)程。

1.將凍存管從液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解凍，輕柔持續(xù)地?fù)u動(dòng)凍存管，直到只剩下一個(gè)小冷凍團(tuán)。從水浴槽取出凍存管，70%乙醇擦拭進(jìn)行消毒。

2.使用移液管將凍存管中含有H9細(xì)胞的凍存液輕輕轉(zhuǎn)移至一個(gè)含有5-6mL已經(jīng)預(yù)熱的培養(yǎng)基的15mL離心管中，過(guò)程必須輕柔防止吹散細(xì)胞團(tuán)。

3.室溫300g離心5min。

4.吸出培養(yǎng)基，確保細(xì)胞團(tuán)完整。

5.然后緩慢加入1mL培養(yǎng)基，用手指輕彈離心管底部，使細(xì)胞團(tuán)脫離底部并分散。

6.輕輕的將此1mL細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至已包被的培養(yǎng)皿/板/瓶，根據(jù)最終培養(yǎng)細(xì)胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。

7.將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預(yù)熱）。