人結(jié)直腸

產(chǎn)品信息

其他自備材料和試劑

ABW &?；锘|(zhì)膠

上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基  

類器官消化液  

潤(rùn)洗液

類器官冷凍保存培養(yǎng)基(無(wú)血清)  

DPBS (1X)，液體，不含鈣和鎂  

胎牛血清(FBS)  

EDTA

人結(jié)直腸類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基和穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)基的制備

采用無(wú)菌技術(shù)制備人結(jié)腸類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基和穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)基。在人結(jié)腸類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的類結(jié)腸器官絕大多數(shù)由LGR5干細(xì)胞，循環(huán)轉(zhuǎn)運(yùn)擴(kuò)增(TA)細(xì)胞，早期腸細(xì)胞和少量杯狀細(xì)胞組成。在人結(jié)腸類器官穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的類結(jié)腸器官含有LGR5干細(xì)胞、TA細(xì)胞、早期和成熟腸細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、M細(xì)胞和腸內(nèi)分泌細(xì)胞，以及少量簇狀細(xì)胞。

以下是準(zhǔn)備 10mL complete medium培養(yǎng)基的示例，如所需量不同，可相應(yīng)調(diào)整用量。

1.冰上解凍人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子B、人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子C、人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子D。

注意： 解凍后，建議將人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子B、人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子C、人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子D分別分裝后保存取用，避免反復(fù)凍融。

2. 配制人結(jié)腸類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基，專門(mén)用于原代培養(yǎng)和復(fù)蘇。添加200 μL人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子B (50x)、40 μL人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子C (250x)、40 μL人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子D (250x)、至9.72 mL人結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混合均勻。

3.配制人結(jié)腸類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基，專門(mén)用于培養(yǎng)傳代。添加200 μL人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子B (50x)、40 μL人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)因子C (250x)至9.76 mL人結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混合均勻。

注意：配制后的人結(jié)腸類器官擴(kuò)增培養(yǎng)基和穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)基可在 2-8°C 儲(chǔ)存，建議在兩周內(nèi)使用。人結(jié)腸類器官培養(yǎng)因子B(50x)內(nèi)含有細(xì)菌及真菌抗生素(50x)。