801009 NEST爬片6孔801009

NEST 801009 爬片 6孔

適用于細(xì)胞培養(yǎng)板 100個(gè)/包

1.爬片可用一般的蓋玻片，也可用爬片；可適合多種細(xì)胞的爬片。

2.應(yīng)用蓋玻片，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；

3.裁剪時(shí)可用前護(hù)士輸液用于打開(kāi)玻璃安瓶的小沙輪，或者是口腔科的那種小沙輪，輕輕劃一下后，稍用力一掰就分開(kāi)了

4.如果接種大皿的話(huà)，我一般不將蓋玻片切開(kāi)，直接清潔后放入培養(yǎng)皿中，到染色時(shí)再將之切開(kāi)，這樣既保證了細(xì)胞均一性，又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色

5.將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并guoye，第2天先用自來(lái)水沖洗20遍，再置于無(wú)水酒清中浸泡6小時(shí)，再用三蒸水沖洗3遍（個(gè)人認(rèn)為主要目的是將 酸沖洗干凈就可以了，如果不干凈的話(huà)，細(xì)胞帖壁不好），放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓**。

6.高壓后取出放入烤箱中烤干，備用?？靖珊罂煞湃氤瑑襞_(tái)中。

細(xì)胞爬片

1.消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于培養(yǎng)基中。

2.加細(xì)胞時(shí)，根據(jù)玻片的大小，先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起，造成雙層細(xì)胞貼片。整個(gè)過(guò)程注意無(wú)菌操作。

3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

4.待細(xì)胞貼壁后，可去上清加含藥培養(yǎng)基。

5.按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，作用一定時(shí)間后取玻片。取玻片時(shí)由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊，張力較大，我一般將注射器針頭針尖向背面弄個(gè)小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h，48h，72h等這樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)的話(huà)，將所需數(shù)量的爬片取出時(shí)應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞爬片的固定

細(xì)胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。當(dāng)然，根據(jù)研究目的，PBS洗也不是一定要做的，比如做凋亡的TUNEL染色時(shí)就避免洗，因?yàn)榈蛲龅募?xì)胞在洗的過(guò)程中有可能會(huì)脫落。

另外在保存細(xì)胞爬片的時(shí)候，一般用培養(yǎng)皿或板，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片，這樣方便做實(shí)驗(yàn)時(shí)取片。然后蓋上蓋子，并在蓋子上做標(biāo)記，為避免混淆，可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個(gè)月的片子做免yi組化是沒(méi)有問(wèn)題的。