裸鼠皮下成瘤模型構(gòu)建

裸鼠皮下成瘤模型構(gòu)建動物選擇

如果需要構(gòu)建一個同源的腫瘤模型，應(yīng)該選擇相同基因的小鼠品系，如C57BL/ 6和Balb/ c，前者是廣泛使用的實驗室嚙齒動物，因為它既健壯又容易繁殖。然而，如果需要構(gòu)建異種腫瘤移植模型，則需要使用免疫缺陷小鼠。其中包括胸腺不全的裸鼠、免疫缺陷型小鼠(SCID)、 NOD /SCID等小鼠。NSG小鼠缺乏成熟的T細(xì)胞、B細(xì)胞和最自然的殺傷活性；它們在先天免疫和細(xì)胞因子信號通路中也有許多缺陷。一般來說,小鼠的免疫缺陷越嚴(yán)重，腫瘤移植率最高。

裸鼠皮下成瘤模型構(gòu)建造模方法

1、細(xì)胞是貼壁細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)在 RPMI-1640 培養(yǎng)基中，含 10%胎牛血清，100U/mL 的青mei素，100ug/mL 的鏈mei素，培養(yǎng)在 37℃含 5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。
細(xì)胞傳代培養(yǎng)：當(dāng)細(xì)胞長至 80-90%時，去除培養(yǎng)基，加入 PBS 洗 1-2 次，去除 PBS后，加入 1ml 胰mei消化 1-3min 后，加入 3ml wan全培養(yǎng)基中和胰mei終止消化，將消化的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。倒掉上清后，加入 3ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1:3 傳代至培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。
2、將長到培養(yǎng)皿 80%-90%的細(xì)胞用胰mei消化下來，1000rpm 離心，去除上清，加入wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞分別種在 6 孔板中，每孔種 1×105個細(xì)胞。
3、待細(xì)胞貼壁后，按照 MOI=1:10 的比例加入慢病毒感染細(xì)胞，感染 24h 后，去除含病毒的培養(yǎng)基，加入wan全培養(yǎng)基。培養(yǎng) 48h 后，加入 puromycin 進(jìn)行篩選。
4、將細(xì)胞進(jìn)行擴增培養(yǎng)。待細(xì)胞長到zhi定數(shù)量時，將細(xì)胞用胰mei消化下來，1000rpm離心后，去除上清，加入 PBS 將細(xì)胞洗一遍，再次加入 PBS 重懸，對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，將數(shù)量調(diào)整為 2×107個細(xì)胞/ml。
5、8周齡15只裸鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，隨機分為3組，每組分別在右腋皮下接種2×106（100ul/只）細(xì)胞（細(xì)胞分為對照組細(xì)胞即未處理的細(xì)胞，NC 組細(xì)胞即感染 NC 病毒的細(xì)胞，shRNA 細(xì)胞即感染 sh-RNA 病毒的細(xì)胞）。接種約兩周后出現(xiàn)腫瘤結(jié)節(jié)，每周用游標(biāo)卡尺測量腫瘤大小兩次。將裸鼠放入鼠籠中正常飼養(yǎng) 4 周后處死裸鼠，取裸鼠腫瘤拍照凍存。