AP01L024 RIPA裂解液（中）
| 參考價(jià) | ￥158.00 |
- 公司名稱 和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司
- 品牌Life-iLab/李記生物
- 型號(hào)AP01L024
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間2025/2/9 16:11:45
- 訪問(wèn)次數(shù) 755
| 100ml | 158.00元 | 999 件可售 |
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胎牛血清，轉(zhuǎn)染試劑（高效），凍存液（普通），cck-8，1640培養(yǎng)基，PBS液體，凋亡試劑盒，熒光素鉀鹽，蛋白Mark，發(fā)光液（超敏），快速封閉
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100ml |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | AP01L024 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
RIPA裂解液（中）是一種經(jīng)典的動(dòng)物組織/細(xì)胞快速裂解液，通過(guò)組合離子型去垢劑和非離子去污劑對(duì)組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì)，對(duì)細(xì)胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用。
李記生物 RIPA 裂解液(中) 不含 PMSF 組分; 適用于 PAGE、Western Blotting 和免疫沉淀(IP)的研究。
訂購(gòu)信息
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
| AP01L024 | 100mL |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。4℃保存，有效期 12 個(gè)月。
配方表
25mM Tris•HCl，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，pH 7.6
使用方法
貼壁細(xì)胞
1. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次。按照 6 孔板每孔加入 150-200ul 的裂解液的比例均勻加
入裂解液，如果細(xì)胞密度過(guò)高可增加裂解液的量至 250-300 uL?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^(guò)少會(huì)使細(xì)胞裂解不
充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。
3. 用槍吹打數(shù)下，冰上放置 10 min，期間每隔 2 min 用槍吹打數(shù)下。
4. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞裂解液于 1.5 mL EP 管中。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5min。
6. 收集上清。
懸浮細(xì)胞
1. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2. 收集細(xì)胞 0.5~2×107于 1.5mL 離心管中，1mL 預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次，1,000xg 離心 3 min，棄上清，
重復(fù)三次。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細(xì)胞密度過(guò)高可增加裂解液的
量至 250-300uL?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^(guò)少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。
4. 用槍吹打數(shù)下并劇烈震蕩，冰上放置 10 min，期間每隔 2 min 震蕩一次。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5 min。
6. 收集上清。
組織樣品
1. 把組織jian成細(xì)小的碎片。
2. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
3. 按照每 100mg 組織加入 1mL 裂解液的比例加入裂解液（如裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液，如果需要
增加蛋白濃度可適當(dāng)減少使用的裂解液體積）。
4. 用勻漿器勻漿，直至充分裂解（為防止蛋白降解請(qǐng)于冰上操作）。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5 min。
6. 收集上清。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 如需檢測(cè)磷酸化蛋白，則需要額外添加磷酸酶抑制劑 II cocktail（50×）(貨號(hào):AP03L025) 。
3. RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA
等的復(fù)合物。在不檢測(cè)基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；
如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心
取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時(shí)，通常不必進(jìn)行超
聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。
4. RIPA 裂解液（中）含有較高濃度的去垢劑，不能用 Bradford 法測(cè)定蛋白。
5. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。
然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使
用勻漿器那樣裂解得比較充分。
6. 通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 μL 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量
到 200 μL 或 250 μL。
表 1: RIPA 裂解液的使用量
| 樣品來(lái)源 | 培養(yǎng)容器 | 收獲細(xì)胞數(shù) | RIPA 用量 | 可制備樣品數(shù) |
| 細(xì)胞 | 6 孔板 | 2.5 x 10^6 | 150-250 μL | 400~600 |
| 60 mm 培養(yǎng)板 | 5.2 x 10^6 | 300-500 μL | 200~300 | |
| 90 mm 培養(yǎng)板 | 12.2 x 10^6 | 500-1000 μL | 100~200 | |
| 25 cm2培養(yǎng)瓶 | 5 x 10^6 | 300-500 μL | 200~300 | |
| 75 cm2培養(yǎng)瓶 | 2 x 10^7 | 1000-2000 μL | 50~100 | |
| 組織 | 20 mg 組織塊 | 2.5 x 10^6 | 150-250 μL | 400~600 |
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