A0605 2XRAPA HiFi PCR Mix試劑

2XRAPA HiFi PCR Mix試劑

特征
超保真擴增：~280倍Taq的保真性能，是載體構(gòu)建、點突變、NGS模板擴增、基因合成的最佳用酶。 快速擴增：具有6kb/min的擴增能力。 長片段擴增：質(zhì)粒、λ DNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb，基因組可以有效擴增>8 kb，cDNA可以有效擴增>8kb。
儲存
長期儲存置于-20°C以下，可保存2年，避免反復(fù)凍融；短期使用置于4°C（3個月）保存，一經(jīng)融化后請放置于4°C，勿再凍存。
反應(yīng)實例
1. 長片段擴增能力
分別以λDNA、human gDNA、human cDNA為模板，使用RAPA HIFI PCR Mix進行擴增，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles，結(jié)果如上圖所示，對于不同種類DNA模板的長片段靶基因，RAPA HIFI PCR Mix均有良好的擴增性能。
常見問題及解決方案：
無擴增或產(chǎn)量低 循環(huán)數(shù) 退火溫度 模板DNA純度和用量 延伸時間 引物用量 引物設(shè)計 增加循環(huán)數(shù)至35~40cycles 以2℃為單位降低退火溫度 使用高純度的模板DNA，使用合適的模板量。 適當(dāng)增加延伸時間 在0.1μM~0.5μM之間選取合適的引物量 重新設(shè)計優(yōu)化引物 出現(xiàn)雜帶或Smear 退火溫度 引物濃度 循環(huán)數(shù) 模板DNA使用量 引物 以2℃為單位提高退火溫度 降低引物濃度至0.2μM 降低循環(huán)數(shù)至25~28cycles 使用合適的模板量，不要過多使用 重新設(shè)計優(yōu)化引物

恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

2XRAPA HiFi PCR Mix試劑更多產(chǎn)品咨詢：

2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

2XRAPA3G全能PCR Mix

2XRAPA3G全能PCR Mix(with dye)

RAPA3G植物組織直擴PCR試劑盒

RAPA3G動物組織直擴PCR試劑盒

2×RAPA3G Multiplex PCR Mix

HiFi One-Step RT-PCR Mix(電泳)

RCA滾環(huán)擴增試劑盒

G5U Plus HiFi DNA Polymerase

HotStart G5U Plus HiFi DNA Polymerase

G5U Plus HiFi PCR Mix

Homo Blood PCR Mix

COD HiFi PCR Mix

AccurPrime RCA Kit

Super Taq DNA Polymerase

RAPA HiFi DNA Polymerase(5U/ul)

HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,無甘油)

SD DNA Polymerase (10U/ul)

Tli (exo-) DNA Polymerase(5U/ul)

Therminator DNA Polymerase (2 U/μl)

Taq FS DNA Polymerase(5U/ul)

3173 DNA Polymerase(5U/ul))

Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）

ThermoStable V Reverse transcriptase（200U/ul）(無甘油)

TGIRT-III Reverse transcriptase (10pmol/ul) 50ul

RNaseOUT-RNase Inhibitor (40 U/μl)

RnaseOUT-RNase Inhibitor(80U/ul), 無甘油

Murine Rnase inhibitor(40U/ul)

Murine Rnase inhibitor(80U/ul), 無甘油

Equi-phi29 DNA Polymerase

Klenow Fragment(exo-)

Bsu DNA聚合酶 大片段

Sau DNA Polymerase

T4 DNA Polymerase (exo-)

Hi T7 RNA Polymerase

TdT末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase)

加A聚合酶（E.coli）

Super Taq DNA Polymerase

dNTP Mixture (10 mM each)

rNTP Mixture(25 mM each)

6XSafe Dye Loading Buffer