堿性磷酸酶（ALP）檢測試劑盒5

2-8℃ 避光

開蓋后組份按要求條件保存。

6個月

分光光度計

血清血漿/組織/細(xì)胞

分光光度計

1.可見分光光度計
2.恒溫水浴鍋
3.離心機
4.漩渦混勻器
5.移液器

1.純水

1.離心管
2.吸頭

1.待測樣品中不能含有磷酸酶抑制劑。
2.樣品避免反復(fù)凍融。
3.如果沒有分光光度計，也可以使用酶標(biāo)儀測定。
4.所測樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)稀釋樣品后重新測定。
5.空白管如果顯紅色，說明ALP顯色液不可用，應(yīng)丟棄。
6.加入顯色基液時，應(yīng)迅速，并且及時混勻，否則顯色不充分。

樣品測定：
1. 配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液
取出試劑D：標(biāo)準(zhǔn)品1mg/ml恢復(fù)至室溫后，取0.1ml溶解于1.9ml的試劑E：ddH2O中，使?jié)舛葹?.05mg/ml，即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液。
參照下表稀釋系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液

2. 樣品準(zhǔn)備：
1) 細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要需適當(dāng)勻漿；低速離心取上清，-80℃凍存，用于堿性磷酸脂酶的檢測；
2) 血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定；尿液通常也可以直接用于測定，-80℃凍存，但為了消除樣品本身顏色的干擾，需設(shè)置加了血漿或血清但不加底物的對照；
3) 高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的堿性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等進行稀釋，如雞血清、血漿可稀釋5~10倍后檢測。

3. 加樣：
依照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免氣泡的產(chǎn)生。如果樣品中的堿性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再測定。樣品的檢測能設(shè)置平行管。
立即混勻，510nm，0號管（ddH2O）調(diào)零，測各管吸光度。

計算公式：
堿性磷酸酶金氏活性單位的定義：
在37℃條件下，100ml待測樣品與顯色底物（即ALP顯色液所含物質(zhì)）作用15分鐘，產(chǎn)生1mg酚為一個金氏單位。

以系列標(biāo)準(zhǔn)品工作液（1~5號管）對應(yīng)的金氏單位為X軸，以相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)管吸光度（1~5號管）為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以測定管與空白管的吸光度值的差額為實際的吸光度，用該差值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比，算出酶活力單位。