CD19+B細(xì)胞（PBMC亞型）

CD19+B 細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)最主要的 B 細(xì)胞亞群，CD19 在 B 細(xì)胞活化以及信號(hào)傳到中起協(xié)同受體作用，調(diào)節(jié) B 細(xì)胞活化及增殖， 參與 B 細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)功能，并介導(dǎo) T 細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞殺傷在免疫應(yīng)答中起到關(guān)鍵作用。CD19+B 細(xì)胞在免疫缺陷病、自身 免疫病、感染和腫瘤等疾病的發(fā)生和發(fā)展中扮演重要角色。主要涉及到癌癥治療、疫苗開發(fā)、免疫缺陷疾病的治療、自身 免疫疾病的治療和藥物篩選和毒性測(cè)試相關(guān)研究。

細(xì)胞復(fù)蘇說(shuō)明書

一、試劑耗材

2 復(fù)蘇培養(yǎng)基（10%滅活FBS的DMEM/RPMI-1640培養(yǎng)基）；

2 實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基

2 移液槍；

2 15ml離心管；

2 水浴鍋；

2 75%酒精；

2 離心機(jī)；

2 計(jì)數(shù)儀

二、細(xì)胞解凍

1、將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋中預(yù)熱；

2、取15mL離心管加入5-10mL預(yù)熱的培養(yǎng)基置于生物安全柜中備用；

3、從干冰/液氮中取出細(xì)胞，將凍存管盡可能多的浸入液面以下（至少凍存液部分全部在液面以下），確保管蓋在液面上方，在37℃水浴鍋中輕柔水平畫圈晃動(dòng)凍存管使其快速融化，直到管內(nèi)只剩小片冰晶，融化過(guò)程中可隨時(shí)觀察融化情況，大約耗時(shí)120s；

4、用75%酒精消毒凍存管外部后，將凍存管拿進(jìn)生物安全柜中使用無(wú)菌紙或無(wú)菌布擦干管壁，然后開蓋，將管內(nèi)細(xì)胞懸液輕輕吹打混勻；

5、將細(xì)胞懸液滴加至已準(zhǔn)備好培養(yǎng)基的15mL離心管中，吸1mL培養(yǎng)基潤(rùn)洗一下凍存管，然后蓋上蓋子顛倒混勻；

6、室溫下，以300g的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，轉(zhuǎn)移上清至另一個(gè)干凈的離心管中，以防離心后細(xì)胞數(shù)量發(fā)生較大偏差；

7、加入2mL實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸，然后定容至5mL,混勻準(zhǔn)備計(jì)數(shù)；

8、取10uL細(xì)胞懸液，按1:1混合AO/PI后使用計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)或使用臺(tái)盼藍(lán)染色然后使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，記錄細(xì)胞活率和細(xì)胞密度；

9、下面提供血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)辦法：

N =血球計(jì)數(shù)板的4角大方框所數(shù)的所有細(xì)胞個(gè)數(shù)

d =稀釋倍數(shù)

細(xì)胞數(shù)量/管=N÷4×2×d ×    mL=     × 10⁴

細(xì)胞活率=未被臺(tái)盼藍(lán)染色的細(xì)胞個(gè)數(shù)÷細(xì)胞總數(shù)×1OO%=    %

10、計(jì)數(shù)之后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，添加實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基調(diào)整您需要的細(xì)胞密度進(jìn)行接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)。

三、備注

1、若您需要再次洗滌細(xì)胞，重復(fù)步驟6-8，每次洗滌會(huì)造成10-15%的細(xì)胞損失；

2、若離心后細(xì)胞數(shù)量低于預(yù)期，將步驟6的上清液再次離心，可使用400g/10min離心條件離心后重懸計(jì)數(shù)；