BH3465 OK 負鼠腎上皮細胞

 細胞介紹

種屬:成年雌性負鼠
細胞來源：國家資源庫

細胞形態(tài): 上皮樣,貼壁生長。

含量：>1x106  細胞數(shù)

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

 用途：僅供科研使用。
細胞背景：OK 是從成年雌性負鼠的近端小管中分離出來的上皮細胞系。此細胞株最初是為研究 X 染色體失活時提供 X 染色體，隨后發(fā)現(xiàn)它是好的腎近曲小管上皮細胞的細胞培養(yǎng)模型。此細胞在培養(yǎng)時表達多種受體，α 2 腎上腺素能表達;心房利鈉肽(ANP)表達;5 -羥色胺,表達;甲狀旁腺激素(PTH)表達;α 2 腎上腺素能;5 -羥色胺;甲狀旁腺激素;心鈉肽(ANP)。并被廣泛地用作研究這些受體的模型。
培養(yǎng)條件:
1）準備 DMEM + FBS 10% +P/S 1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
貼壁細胞參考：

一. 收貨后消毒靜置待細胞全部穩(wěn)定后拍照。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA ydbm, 1-2ml 于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩等脫落 90%以上終止消化，一般小于 1分鐘以內(nèi)，甚至不加ym有部分貼壁非常不牢固的細 胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細胞則置于 37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養(yǎng)箱震蕩

注意事項：
幫助細胞脫落，如果脫落 90%以上則對應(yīng) 3-6ml 含有 10%血清的培養(yǎng)基終止，以防ym殘留。如果貼壁 非常牢固的細胞，脫落的比例比較低，也不超過2分鐘后終止消化，再加入 1ml 培養(yǎng)基讓細胞緩沖后再過2分鐘進行二次消化，反復(fù)分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護細胞膜?；虿捎霉萎a(chǎn)刮細胞的方式處理也可以。總歸原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。

三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進行。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種。
運輸形式：
常溫發(fā)貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置 2-6 小時后觀察密度和狀態(tài)并拍照 2-3 張反饋給銷售，密度達標就可以傳代。前期傳代比例 1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成 1 個 1ml 凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存足量種子后才擴增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨：常規(guī)細胞發(fā)貨凍存管 2 只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個復(fù)蘇不成功時嚴格按照廠家要求復(fù)蘇第二個，均沒有復(fù)蘇成功的情況及時留存復(fù)蘇照片通知銷售處理售后問題。
生物安全：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。