iBind(Flex) 蛋白質(zhì)免疫印跡處理系統(tǒng)

靈活的規(guī)格，只需更少的一抗用量，重復(fù)性更好的結(jié)果

Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白質(zhì)免疫印跡處理系統(tǒng)采用靈活的印跡處理方法，可助您顯著縮短操作時(shí)間，檢測不同規(guī)格的印跡膜，并輕松優(yōu)化抗體用量。該系統(tǒng)利用 順序側(cè)流技術(shù), （毛細(xì)管作用的一種簡單形式），可自動(dòng)化完成Western Blot實(shí)驗(yàn)中所有的抗體孵育和洗滌步驟，您只需將一抗、二抗溶液和洗滌緩沖液加入到設(shè)備中，設(shè)備即可自動(dòng)進(jìn)行相關(guān)操作。在3小時(shí)內(nèi)，就能得到可立即用于最終檢測的印跡膜。iBind Flex蛋白質(zhì)免疫印跡處理系統(tǒng)在帶來靈活的解決方案的同時(shí)，也兼顧了自動(dòng)化的便捷性。

• 靈活性—可處理1張中型印跡膜、2張微型印跡膜或6張垂直剪切膜條，并可在一次實(shí)驗(yàn)的不同膜上采用不同的抗體
• 兼容性—可使用硝酸纖維素膜或PVDF膜，可用直接標(biāo)記的一抗或二抗進(jìn)行檢測（AP、HRP或熒光標(biāo)記）
• 節(jié)約成本—用于蛋白質(zhì)免疫印跡時(shí)，比傳統(tǒng)孵育方式最多可節(jié)省80%的一抗

只需更少的一抗，就能獲得更好的蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果。對(duì)比手動(dòng)處理（在孵育盒中進(jìn)行孵育和洗滌步驟）和Invitrogen™ iBind™ Flex系統(tǒng)處理的蛋白質(zhì)免疫印跡。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝膠和MES SDS電泳緩沖液分離樣本，隨后，使用iBlot™ 2干轉(zhuǎn)系統(tǒng)轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上。每塊凝膠具有10個(gè)泳道，樣本為2倍梯度稀釋的293細(xì)胞提取物（30 µg-0.06 µg）。使用下述條件進(jìn)行抗體孵育和洗滌后，將印跡膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分鐘，并使用成像系統(tǒng)顯色。

• MEK2 (45 kDa)——兔抗MEK2抗體，按1:1000 稀釋（用于iBind系統(tǒng)：將2µL抗體溶于2mL iBind溶液中，用于手動(dòng)孵育盒操作時(shí)，將10µL抗體溶于10mL 緩沖液中）。
• Securin(428 kDa)——兔抗Securin抗體，按1:1000 稀釋（用于iBind系統(tǒng)：將2µL抗體溶于2mL iBind溶液中，用于手動(dòng)孵育盒操作時(shí)，將10µL抗體溶于10mL 緩沖液中）。
• 二抗：山羊抗兔IgG，使用iBind系統(tǒng)，按1:600稀釋（3.33 µL抗體溶于2mL iBind溶液中），用于手動(dòng)孵育盒操作時(shí)，按1:1800稀釋（將5.55 µL抗體溶于10mL iBind溶液中）。

使用垂直剪切膜條和熒光檢測都獲得了出眾的蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果。 對(duì)比手動(dòng)處理（在孵育盒中進(jìn)行孵育和洗滌步驟）和Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白質(zhì)免疫印跡處理系統(tǒng)處理的印跡膜。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝膠和MES SDS電泳緩沖液分離樣本，隨后，使用iBlot™ 2干轉(zhuǎn)系統(tǒng)轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上，將每張印跡膜剪切成3泳道膜條。最后，使用成像儀進(jìn)行成像。

樣本和泳道如下所示：

• 泳道 1:  Thermo Scientific™ PageRuler™預(yù)染NIR蛋白分子量標(biāo)記(3 µL)
• 膜條 1:  磷酸化Akt提取物（15 µg、7.5 µg、3.75 µg）和Elk-1融合蛋白（150 ng、75 ng、37.5 ng）
• 膜條 2:  HeLa細(xì)胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）
• 膜條 3:  磷酸化Akt提取物（15 µg、7.5 µg、3.75 µg）
• 膜條 4:  Elk-1融合蛋白（150 ng、75 ng、37.5 ng）
• 膜條 5:  HeLa細(xì)胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）
• 膜條 6:  HeLa細(xì)胞提取物（30 µg、15 µg、7.5 µg）