P0819 諾博萊德 Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 P0819
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/3/7 9:35:01
- 訪問次數(shù) 35
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 30T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | P0819 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 主要用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸 |
諾博萊德 Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒
產(chǎn)品簡介：
聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)。它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠及 SDS-聚丙烯酰胺凝膠；非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開，主要用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。常規(guī) SDS-PAGE凝膠電泳適用于分離大分子蛋白，對于小分子量的蛋白或多肽，分辨率大大降低。
NobleRyder Tricine-SDS-PAGE 電泳能夠較好的分離10KD 以下的蛋白或多肽，是電泳法分離多肽的主要方法，30T 一般可以配制30～35 塊膠，具體配制的量應(yīng)根據(jù)器具大小決定。電泳分離后可直接考馬斯亮藍(lán)染色、銀染等。
產(chǎn)品組成：
編號 名稱 | P0819 30T | Storage |
試劑(A): 49.5%T 3%C | 2ml | 4℃ |
試劑(B): 49.5%T 6%C | 60ml | 4℃ |
試劑(C): Gel buffer | 90ml | 4℃ |
試劑(D): Glycerol | 20ml | RT |
試劑(E): Ammonium Persulfate | 0.3g | RT |
試劑(F): TEMED | 2×1ml | 4℃ 避光 |
使用說明書 | 1 份 | |
操作步驟(僅供參考)：
1、配制10%過硫酸銨(APS)：直接在0.3g Ammonium Persulfate中加入3ml蒸餾水，充分溶解，分裝成小份儲存于-20℃或 4℃。注意：一般用1.5mlEP 管分裝成 0.5-1ml每支，-20℃保存，每支使用 2-3 次即棄用。短期使用時，可保存于4℃，1 周有效。
2、根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度，按照附表配制分離膠：
① 將不同體積的蒸餾水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol 加入到離心管中充分混合。
② 加入10%APS 和 TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以使溶液充分混勻。
③ 在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1mm mini-gel，分離膠溶液加約 4ml），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層 1～3cm 的水層，使凝膠表面保持平整。
④ 靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
3、根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度，按照附表配制夾層膠：
① 去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。
② 將不同體積的蒸餾水、49.5%T 3%C 和 Gel buffer 加入到離心管中混合。
③ 加入10%APS 和 TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以使溶液充分混勻。
④ 將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對于 1mm 的 mini-gel，夾層膠溶液加約1ml)，然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層 1～2cm 的水層，使凝膠表面保持平整。
⑤ 靜置，待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
4、根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度，按照附表配制濃縮膠：
① 去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。
② 將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和 Gel buffer加入到離心管中混合。
③ 加入10%APS和 TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以使溶液充分混勻。
④ 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
⑤ 靜置，待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，避免破壞加樣孔。進(jìn)行電泳操作。
5、電泳
將電泳槽置于4℃或冰水浴中，外槽加入陽極緩沖液，內(nèi)槽加入陰極緩沖液，30V 預(yù)電泳10 min，將處理好的樣品加入點樣孔， 30V 電泳 1h， 100V 電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳，進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。
附表 Tricine-SDS-PAGE 凝膠配方表
成分 | 分離膠 | 夾層膠 | 濃縮膠 | ||
濃度/體積 | 20%/4.5ml | 16.5%/4.5ml | 15.5%/4.5ml | 10%/2ml | 10%/2ml |
49.5%T 3%C | - | - | - | 0.407ml | 0.16ml |
49.5%T 6%C | 1.82ml | 1.5ml | 1.395ml | - | - |
Gel buffer | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml | 0.667ml | 0.667ml |
Glycerol | 0.48ml | 0.48ml | 0.48ml | - | - |
蒸餾水 | 0.7ml | 1.02ml | 1.125ml | 0.926ml | 1.344ml |
10%APS | 40μl | 40μl | 40μl | 20μl | 20μl |
TEMED | 5μl | 5μl | 5μl | 3μl | 3μl |
注意事項：
1、過硫酸銨配制成10%APS 溶液后應(yīng)當(dāng)-20℃保存，用2~3 次，亦可4℃保存幾天。
2、TEMED 易揮發(fā)，使用后請蓋緊瓶蓋。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關(guān)系密切?？赏ㄟ^適當(dāng)調(diào)節(jié)TEMED 的用量，控制在不同的室內(nèi)環(huán)境下凝膠凝聚的速度。
3、配制聚丙烯凝膠的過程中，如果室溫較低，可以置于37℃放置，加速凝固。在液體混勻的時候應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
4、在分離膠上層加蒸餾水時要緩慢，速度不宜過快。
5、49.5%T 3%C 和49.5%T 6%C 為不同比例的Acr-Bis，有輕微神經(jīng)毒性，請小心操作。
有效期：24 個月有效。
諾博萊德 Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒
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