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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學用試劑>amresco E859 1g- g 418;G418;g-418;

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amresco E859 1g- g 418;G418;g-418;

參考價 350
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 公司名稱 上海葉舟生物科技有限公司
  • 品牌 AMRESCO
  • 型號 amresco E859 1g-
  • 產(chǎn)地 美國
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 更新時間 2018/4/23 4:14:01
  • 訪問次數(shù) 721
產(chǎn)品標簽

G418;g-418;g 418

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!


上海葉舟生物科技有限公司從成立之初就秉著服務科研 , 傳承文明的理念 , 努力為中國廣大生命科學工作者提供Z全面的產(chǎn)品與信息咨詢 。 傳播科技文明 , 服務人類健康一直都是生命科學研究人員奮斗的目標 , 在這個文明的梯隊里 , 我們能為廣大科研工作者提供一些便捷的服務 , 使他們能全身心的投入工作 , 擺脫一些瑣事的煩惱 , 把較大的能量釋放到Z前沿的工作中去 , 為此我們感到十分的欣慰。   浩然生物始終堅持社會效應與公司發(fā)展的雙重奉獻 , 嚴格穩(wěn)定的財務政策確保了我們向科技工作者提供產(chǎn)品與服務的持續(xù)性 , 同時浩然生物也和廣大科研工作人員一樣努力的工作 , 在品牌不斷延伸與壯大的同時時刻警醒自己知恩圖報回饋社會的責任。       縮小文明差距 , 擴大科技交流一直是我們的工作指向 , 為此 , 我們時刻關(guān)注著世界生命科學的較早動態(tài) , 并努力打造一個相互交流的平臺 , 把優(yōu)秀的民族產(chǎn)品介紹給世界 , 把 *的技術(shù)與資訊帶回中國 , 文明的平衡與和諧是我們永遠追求的目標。同時我們要特別感謝在公司發(fā)展的過程當中給過我們很多建議與意見的中國當代的科技工作者,是他們使我們感到了公司必須盡快發(fā)展的責任與壓力,我們也要感謝在公司發(fā)展過程當中給過我們很多競爭壓力與困難的國內(nèi)外的生物公司,是他們使我們感到了公司必須居安思危逆流而上,時刻保持創(chuàng)新的思想與大量的行動,努力增強抗擊打與出奇制勝的能力。上海浩然生物技術(shù)有限公司隨時歡迎與期待著各位用戶與朋友的批評與建議。

G418,MTT,IPTG,DTT,STZ,ONPG

 

G418
 
  說明:G418是一種氨基糖苷類抗生素 ,產(chǎn)品來源:上海浩然生物技術(shù)有限公司。這種氨基糖類抗生素的結(jié)構(gòu)和新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似,在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的抗性篩選試劑。它通過抑制轉(zhuǎn)座子Tn601,Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對原核和真核等細胞產(chǎn)生毒素 ,包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。當neo基因被整合進真核細胞DNA ,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA ,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的高效表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以廣泛應用。
  溶液配制:G418溶液配制時,一般溶于水配成50mg/ml的原液,使用時再稀釋使用。在篩選菌類和藻類時,一般用5mg/l 的濃度或者更低。篩選哺乳動物細胞是zui大可用400mg/l的濃度。
  篩選
  篩選之前:由于每種細胞對G418的敏感性不同,而且不同的廠家生產(chǎn)的相同濃度的G418的活性不盡相同,所以在篩選之前,一定要確定G418的*篩選濃度。具體如下:將細胞稀釋到1000個細胞/mL,在100ug/mL~1mg/mLG418濃度范圍內(nèi)進行篩選,選擇出在10~14天內(nèi)使細胞全部死亡的zui低G418濃度來進行下一步的篩選試驗。
  由于每種細胞對G418的敏感性不同,一般變動在100ug/ml1000ug/ml范圍。而且不同的廠家生產(chǎn)的相同濃度的G418的活性不盡相同,所以在篩選之前,一定要確定細胞對這一批G418的*篩選濃度。盡管如此,特性明確的細胞系G418的*用量還是穩(wěn)定的?!斗肿?/span>克隆》給出了幾個常用細胞系所需G418的*用量。
  加藥時間:
  由于基因轉(zhuǎn)染到細胞內(nèi)之后要一段時間才能表達出蛋白質(zhì)。所以篩選不能太早;但是也不能太晚,因為轉(zhuǎn)染了外源基因的細胞代謝負荷較大,增值較慢,時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細胞所淹沒,zui終導致篩選不出陽性克隆,一般要在轉(zhuǎn)染24小時之后才開始加G418篩選。隨著細胞的代謝G418的濃度和活性都回下降,所以每3~5天都要更換一次含有G418的篩選液。這時藥物濃度可以降至200ug/ml
  培養(yǎng)液:
  加藥篩選約6天左右,細胞會大量死亡,孔中只剩下的細胞*。這時會出現(xiàn)兩個問題:1.死亡的細胞會裂解釋放出有害物質(zhì),導致那些有neo表達的陽性細胞死亡,即非選擇性死亡。2.孔中細胞數(shù)目很少,細胞之間的信號會變得很弱,也會導致陽性細胞的狀態(tài)不佳甚至死亡。這個時候需要一種特殊的培養(yǎng)液:假如你要轉(zhuǎn)染3T3細胞,在3T3細胞匯合度達到80%的時候,換液,培養(yǎng)過夜之后收集培養(yǎng)液,通過濾器消毒,和新鮮的培養(yǎng)液按11混合備用。再轉(zhuǎn)染后篩選過程中就可以應用這種培養(yǎng)基。
  挑選單克隆的優(yōu)化:
  為了盡量減少陰性克隆的死亡給陽性克隆造成的不利影響以及增加陽性克隆的得率,可以應用套環(huán)法或刮除法結(jié)合有限稀釋法來篩選陽性克隆。加藥后,在高倍鏡下,陽性克隆和陰性克隆很容易辨認,在陽性克隆下用記號筆做個標記。然后刮除隱性克隆,消化陽性克隆后繼續(xù)篩選培養(yǎng);或則用套環(huán)套住陽性克隆,在套環(huán)內(nèi)加胰蛋白酶或EDTA消化,把消化液吸到另外一個新的孔中培養(yǎng)。zui后再用有限稀釋法把陽性克隆在96孔板中篩選。
  鑒定之后:
  一般經(jīng)過4周左右的篩選,得到的陽性克隆都比較穩(wěn)定。但是外源基因如果沒有整合到基因組中的話,目的基因還是很容易丟失的。但是外源基因整合到基因組中的概率太小了,而且是隨機整合,會導致表達的目的蛋白的量產(chǎn)生很大差異。隨著培養(yǎng)時間的延續(xù),那些丟失了外源基因的細胞和很少表達目的基因的細胞會占據(jù)優(yōu)勢,強表達目的蛋白的細胞會越來越少。這樣再次篩選是*的。只有經(jīng)過2次以上的篩選之后才能找到那種我們想要的強分泌目的蛋白的,遺傳穩(wěn)定的細胞克隆。
Amresco相關(guān)產(chǎn)品資料:
Product:G418 SULFATE
Grade: ULTRA PURE GRADE
Appearance: white powder.
Mol. Formula: C20 H40 N4 O10 2H2 SO4
Mol. Weight: 692.7
Code:E859
Storage Condition:COLD

品名
產(chǎn)地
貨號
規(guī)格
單價
備注
G418 Sulfate
Amresco
E859
1g
詢價
現(xiàn)貨
G418 Sulfate
Amresco
E859
5g
詢價
現(xiàn)貨



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