NanoDrop 2000 超微量分光光度計(jì) NanoDrop 2000 超微量分光光度計(jì) ND 2000

一、產(chǎn)品應(yīng)用

      ND-2000是目前國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室中使用的一款微量分光光度計(jì)，其*的性能、準(zhǔn)確的結(jié)果贏得了廣大用戶的好評(píng)。

      該產(chǎn)品可用于以下幾個(gè)方面：

* 紫外檢測(cè)：常規(guī)紫外光波長(zhǎng)下檢測(cè)樣品吸光值；

* 核酸檢測(cè)：可檢測(cè)dsDNA、ssDNA、RNA等不同類型核酸的濃度及其在260nm、280nm處的吸光值；

* 探針檢測(cè)：檢測(cè)熒光標(biāo)記探針的吸光值，可用于去除未能標(biāo)記探針的樣品；

* 細(xì)胞培養(yǎng)物檢測(cè)：檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物在600nm處的吸光值；

* 蛋白檢測(cè)：檢測(cè)普通純化后蛋白的濃度和280nm處的吸光值；

* 蛋白標(biāo)記檢測(cè)：可檢測(cè)被BCA、Bradford或Lowry標(biāo)定的蛋白樣品，自動(dòng)畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算出待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。

二、 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
     NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)是NanoDrop的產(chǎn)品，應(yīng)用液體的表面張力特性，樣品體積只需要 0.5~2ul，在檢測(cè)臺(tái)上，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細(xì)管等耗材檢測(cè)吸收值的優(yōu)點(diǎn)。此產(chǎn)品設(shè)計(jì)受保護(hù)，并在*廣受歡迎，其準(zhǔn)確度與便利性讓科學(xué)家得以更有效率進(jìn)行各項(xiàng)研究。

      NanoDrop 2000使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光譜檢測(cè)，且不需要暖機(jī)，開(kāi)機(jī)后立即使用。搭配高感度CCD array檢測(cè)器，檢測(cè)吸收值可高達(dá)300Abs（dsDNA濃度2~15000ng/ul），大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測(cè)。

       待測(cè)樣品的均質(zhì)性是NanoDrop 2000的zui高要求，一般核酸、蛋白質(zhì)樣品能在檢測(cè)前以vortex mixer震勻?yàn)?，若無(wú)vortex mixer也應(yīng)以pipette吸放數(shù)次混勻。若擔(dān)心genomic DNA可能因前述動(dòng)作而斷裂，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測(cè)前呈現(xiàn)均勻狀態(tài)，以確保 2ul 具有代表性。

      檢測(cè)時(shí)選擇不同檢測(cè)模式，可以得到zui快速的結(jié)果：
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。

● UV-Vis – 190~840nm間所有波長(zhǎng)的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現(xiàn)）。

● A280蛋白質(zhì)定量法 – 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì)，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（mass extinction coefficient）方可計(jì)算。

● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長(zhǎng)吸收值結(jié)果，自動(dòng)畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算R square，待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。

* 蛋白質(zhì)檢測(cè)模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見(jiàn)定量呈色劑，因呈色劑隨時(shí)間會(huì)逐漸加深，使用前請(qǐng)?jiān)旈喸噭┱f(shuō)明書(shū)并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在*時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)，以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線zui多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品zui多可做五重復(fù)。

* 測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用 2ul，每個(gè)樣品檢測(cè)后需以Kimwipes 低塵擦拭紙（編號(hào)： 34155 ）擦拭15~20回，以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。觀看影片。

濃度范圍：

三、技術(shù)參數(shù)：   

1、波長(zhǎng)范圍: 190-840nm；   

2、波長(zhǎng)精度: 1nm；   

3、分辨率: <1.8 nm （FWHM at Hg 253.7 nm）；   

4、其它: 1mm光程長(zhǎng)度（可自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）；   

5、檢測(cè)下限：2ng/μl（dsDNA）；   

6、檢測(cè)上限：15000ng/μl（dsDNA）；   

7、吸光率精確度：0.002 absorbance （1mm光程）；   

8、吸光率準(zhǔn)確性：2%（at 0.76 at 257 nm）；    

9、吸光率范圍：0.02-300 （相當(dāng)于10mm光程）；   

10、核酸檢測(cè)周期：< 5s；   

11、體積：14cm×20cm。

四、使用方法舉例：

dsDNA：在主畫(huà)面點(diǎn)選Nucleic Acid，計(jì)算機(jī)與儀器自動(dòng)完成聯(lián)機(jī)。依照DNA所溶于之液體準(zhǔn)備該溶液（務(wù)必確認(rèn)DNA溶于二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂后再按Measure。

五、結(jié)果整理：

 NanoDrop2000 軟件在偵測(cè)一開(kāi)始會(huì)詢問(wèn)檔案欲存至何處，若未，則檔案會(huì)存在上一個(gè)使用者的檔案內(nèi)。

六、注意事項(xiàng)：

1. 偵測(cè)后立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭臺(tái)面。先取一張將上下臺(tái)面的液體吸走，再將此laboratory wipe吸過(guò)樣品的面反折到內(nèi)部，折迭四次后以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。

2. 同一滴液體只能做一次偵測(cè)，欲重復(fù)定量同一樣品，請(qǐng)擦掉前一滴，重新取出一滴進(jìn)行偵測(cè)。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測(cè)量，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求，原則上不超過(guò) 2ul。并請(qǐng)使用2ul pipette避免體積不足導(dǎo)致液柱無(wú)法完整形成。唯蛋白質(zhì)樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性，務(wù)必使用2ul進(jìn)行偵測(cè)。

4. 當(dāng)軟件跳出錯(cuò)誤訊息時(shí)，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀并依指示進(jìn)行障礙排除。zui常發(fā)生的情形是在偵測(cè)過(guò)程液柱并未正確形成，軟件會(huì)出現(xiàn)以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下臺(tái)面，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起后，擦掉該滴樣品，再重新進(jìn)行偵測(cè)，必要時(shí)可將樣品體積加大至2ul。

5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid （HF）之腐蝕樣品，其它無(wú)腐蝕性之液體皆可使用。

七、日常與定期維護(hù)：

* 平時(shí)保持臺(tái)面及儀器本身清潔。

* 定期校正。

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