哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)

哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)

諾百優(yōu)勢
質(zhì)量保證：可對轉(zhuǎn)染細(xì)胞的外源基因表達(dá)進(jìn)行嚴(yán)格鑒定，包括RNA水平和蛋白水平
篩選后可以得到穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞克隆：質(zhì)粒DNA整合到染色體上；可使用慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的實驗條件，理論上可以
確保每個細(xì)胞只有單拷貝插入。偏向于轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)段，且整合后非常穩(wěn)定，在傳代100次后仍然保留在宿主基因組中，可以克
服使用非病毒載體轉(zhuǎn)染方法構(gòu)建穩(wěn)定株，成功率低，穩(wěn)定性差，穩(wěn)定克隆株易出現(xiàn)不均一（含有非整合細(xì)胞）等缺點。
不同選擇：使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個不同單克隆穩(wěn)定株

原理
通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將靶基因被導(dǎo)入細(xì)胞后，一般在轉(zhuǎn)染后48小時，靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。如若建
立穩(wěn)定的細(xì)胞系，則可對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物，zui常用的直核表達(dá)基因載體的
標(biāo)志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。篩選后可以得到穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞克隆，這就是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。穩(wěn)定
轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA整合到染色體上，使得轉(zhuǎn)染的細(xì)胞可*表達(dá)。哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢在于能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的正確折疊，提
供多種翻譯后加工功能，因而表達(dá)產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面zui接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子。

服務(wù)流程
1） 客戶提供：構(gòu)建好的外源基因載體；待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系（1E6個細(xì)胞，
可傳代，倍增時間小于48小時）；關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)條件的說明
2） 篩選濃度測定：以10 - 14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度
3） 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實驗前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種
細(xì)胞的生長率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞應(yīng)達(dá)到60% - 80%
覆蓋
4） 細(xì)胞轉(zhuǎn)染；抗生素篩選；鑒定篩選結(jié)果
5） 我們提供：構(gòu)建好的穩(wěn)定細(xì)胞系及相關(guān)的外源基因表達(dá)分析