SPE回收率遠超100%？四大原因與精準(zhǔn)排查指南

樣品基質(zhì)中可能存在一些雜質(zhì)，SPE的核心目標(biāo)之一就是去除它們。但如果這些雜質(zhì)未能被有效分離，就會與目標(biāo)分析物一起被洗脫（即“共洗脫”）。在后續(xù)的色譜或質(zhì)譜分析中，這些干擾物可能：產(chǎn)生與目標(biāo)物重疊或難以分辨的色譜峰，導(dǎo)致積分面積偏大；或通過基質(zhì)效應(yīng)增強目標(biāo)物的離子化效率，使質(zhì)譜儀器檢測到的信號高于實際值。

● 優(yōu)化洗滌步驟：調(diào)整SPE方法中的洗滌溶劑種類、濃度或體積，讓雜質(zhì)在洗滌階段被選擇性去除，只留下目標(biāo)分析物吸附在填料上。

● 換用更合適的吸附劑：如果當(dāng)前吸附劑選擇性不足，可考慮更換為選擇性更強的吸附劑。例如，若分析物或雜質(zhì)可電離，采用離子交換吸附劑通常能獲得比反相吸附劑更純凈的提取物。

● 調(diào)整分析方法：如果雜質(zhì)和目標(biāo)分析物的色譜峰能分開，也可以不改動SPE步驟，直接優(yōu)化后續(xù)檢測方法（如調(diào)整流動相、柱溫），使兩者的峰分離，避免干擾。

● 空白扣除：平行處理一個空白樣品，確定干擾物的本底值，并在計算最終結(jié)果時將此空白值扣除。

有時，干擾物并非來自樣品基質(zhì)，而是來自SPE實驗的“源頭材料”——例如洗脫用的溶劑本身含有微量雜質(zhì)，或SPE柱的吸附劑在生產(chǎn)、儲存過程中殘留了一些與目標(biāo)化合物性質(zhì)相似的物質(zhì)。這些污染物會與分析物一起被洗脫，導(dǎo)致檢測結(jié)果偏高。

● 預(yù)清洗吸附劑：在上樣前，使用足量的洗脫溶劑對SPE柱進行預(yù)平衡和清洗，以沖走吸附劑中大部分潛在污染物。

● 空白運行校準(zhǔn)：單獨用“空白SPE柱 + 洗脫溶劑”進行一次實驗（不加載樣品），檢測其中是否有污染物。計算回收率時，從目標(biāo)峰的信號中減去這個空白污染信號，以消除干擾。

● 更換溶劑品牌或批次：如果確認(rèn)是溶劑帶來的污染，直接更換純度更高的溶劑（如從分析純升級為色譜純），或更換另一批次的溶劑，通常能解決問題。

內(nèi)標(biāo)是計算回收率的“基準(zhǔn)”。如果內(nèi)標(biāo)的回收率不穩(wěn)定或顯著低于100%（例如內(nèi)標(biāo)未能很好地從SPE吸附劑上洗脫，或在實驗過程中被降解），那么以它作為基準(zhǔn)進行校正時，就會系統(tǒng)性地計算出偏高的目標(biāo)物回收率。

● 選對內(nèi)標(biāo)：優(yōu)先選擇與目標(biāo)化合物“性質(zhì)相似”的內(nèi)標(biāo)（如結(jié)構(gòu)類似、極性相近、保留行為一致），這樣內(nèi)標(biāo)的回收率能更貼近目標(biāo)分析物，提供更可靠的參考。

● 監(jiān)控內(nèi)標(biāo)行為：密切關(guān)注內(nèi)標(biāo)本身的響應(yīng)和回收率，如果其回收率不理想，則該批次定量結(jié)果的可信度存疑。

● 考慮替代方案：如果內(nèi)標(biāo)法無法穩(wěn)定建立，可嘗試使用在樣品提取完成后、上機前加入的外標(biāo)來計算絕對回收率，作為方法評估的參考。

有時問題并非出在實驗操作，而是出在“計算環(huán)節(jié)”——例如稀釋因子漏算、色譜峰積分錯誤，或分析方法本身存在漏洞，這些都會導(dǎo)致最終的回收率結(jié)果虛高。

● 核查計算過程：重新檢查所有計算公式，重點確認(rèn)稀釋因子（如樣品加載前的稀釋、洗脫后的定容稀釋）是否全部計入，避免因漏算導(dǎo)致結(jié)果偏大。

● 審查積分參數(shù)：重新檢查色譜圖的積分基線和峰識別設(shè)置。不恰當(dāng)?shù)氖謩踊蜃詣臃e分是導(dǎo)致峰面積不準(zhǔn)的常見原因。

● 驗證分析方法：確保儀器方法處于最佳狀態(tài)，校準(zhǔn)曲線線性良好，并且進樣溶劑強度不會引起峰形畸變。