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嬰幼兒奶粉中雙氰胺的檢測(cè)方法(HPLC-UV和HPLC-MS/MS法)

閱讀:2061      發(fā)布時(shí)間:2013-1-30
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北京時(shí)間1月25日凌晨消息,新西蘭牛奶中發(fā)現(xiàn)了有害物質(zhì)——雙氰胺。雙氰胺又名二氰二胺,縮寫DICY或DCD。雖然標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)食品中的雙氰胺*,但高劑量的雙氰胺對(duì)人體是有毒的。
針對(duì)嬰幼兒奶粉中基質(zhì)復(fù)雜的特點(diǎn),本方法加大了凈化材料的用量,以獲得了更好的凈化效果。采用天津博納艾杰爾科技的新一代的Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管(500mg/15mL,貨號(hào):MS-SQA02)和Venusil® HILIC液相色譜柱,建立了奶粉中雙氰胺的MAS-QuEChERS快速前處理方法和LC-UV以及LC-MS/MS檢測(cè)方法。


1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料
液相色譜儀,渦旋振蕩器,超聲波清洗機(jī),氮吹儀。
雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品(CAS: 461-58-5;FW=84.08),新一代Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管,Venusil® HILIC液相色譜柱,微孔濾膜,乙酸銨、乙酸、乙腈為色譜純,實(shí)驗(yàn)用水為超純水。


1.2 實(shí)驗(yàn)步驟
稱取1g試樣于50mL具塞離心管中,加2mL水,渦旋30s,加2ml乙腈渦旋30s。再往現(xiàn)有的提取液中加2mL乙腈,重復(fù)上述提取步驟。再將該提取步驟重復(fù)2次,得到共計(jì)約10mL的提取液。以4000r/min離心5min,將全部上清液加入新一代Cleanert® MAS-QuChERS管中(500mg/15mL),將MAS管上下晃動(dòng)30s,然后渦旋30s后,8000r/min離心5min,取全部上清液(約10ml)于玻璃試管中,50℃下氮?dú)獯蹈桑尤?ml乙腈復(fù)溶,過0.22μm微孔濾膜,待測(cè)。
注:1.做基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)溶液建議選擇以水為溶劑,防止加標(biāo)瞬間發(fā)生蛋白沉淀;
2.乙腈提取分4次,為防止乙腈體積過多時(shí)沉淀蛋白速度過快,影響提取效果。


1.3 實(shí)驗(yàn)條件
1.3.1液相色譜法(HPLC法):
色譜柱:Venusil® HILIC(5μm,100Å,4.6*250mm);
流動(dòng)相: 10mmol/L乙酸銨(pH=4.0):乙腈=15: 85;
波長:220nm;進(jìn)樣量:10µl;柱溫:30℃;流速:0.8mL/min。

1.3.2 LC-MS/MS法:
(1)色譜條件:
色譜柱:Venusil® HILIC( 5μm,100Å,2.1*150mm);
流動(dòng)相:A:0.5mmol/L乙酸銨(pH=4.0)
B:乙腈;
進(jìn)樣量:10µL;柱溫:30℃;流速:0.3 mL/min。

2 流動(dòng)相梯度程序
時(shí)間,min A% B%
0 10 90
0.4 50 50
1.8 50 50
1.9 10 90
7 10 90
*備注:本文曾嘗試過多種C18色譜柱,對(duì)雙氰胺沒有保留,需要使用離子對(duì)試劑,但是無法用于LC-MS/MS;也曾嘗試過MERCK ZIC-HILIC柱,但是得到雙氰胺的峰面積偏差較大,分析原因是其具有陽離子交換基團(tuán),對(duì)雙氰胺有不穩(wěn)定的死吸附。zui后確定使用鍵合丙基酰胺的Venusil HILIC柱,以親水作用色譜機(jī)理對(duì)雙氰胺進(jìn)行保留。
(2)質(zhì)譜條件:
質(zhì)譜儀:API 4000+;離子源:電噴霧離子源;掃描方式:正離子掃描;檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè);CAD:8.00;CUR:20.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;TEM:600.00。
表3雙氰胺質(zhì)譜信息
藥物名稱 監(jiān)測(cè)離子對(duì) DP EP CE CXP
雙氰胺 85.1/68.1 71 10 41 6
  85.1/43.1 71 10 41 6
注:帶“____”的監(jiān)測(cè)離子對(duì)為定量離子對(duì)。

 

 

2.結(jié)果與討論

2.1 液相色譜法:
2.1.1雙氰胺的液相色譜圖

2.1.2實(shí)際樣品基質(zhì)加標(biāo)的線性關(guān)系和檢出限
準(zhǔn)確稱取雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液;
分別稱取1g奶粉試樣,添加一定量標(biāo)準(zhǔn)溶液,配制成含雙氰胺為0.5µg/g,1µg/g,2µg/g,5.0µg/mL和10µg/g的添加樣品,按照上述提取、凈化方法操作,所得凈化液按照上述色譜條件,依次進(jìn)樣檢測(cè)。以雙氰胺含量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),擬合線性方程,結(jié)果見表4:

4 雙氰胺線性方程和定量限(HPLC法)
名稱 保留時(shí)間 線性方程 相關(guān)系數(shù) zui低定量限(S/N=10)
雙氰胺 5.57min Y=108.16X+27.827 0.9971 0.5µg/g

2.1.3準(zhǔn)確度和精密度
選取市售某品牌嬰幼兒奶粉試樣,進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn),結(jié)果見表5
表5 0.5µg/g添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(HPLC法)
平行1 平行2 平行3 平均值 RSD
82.3% 85.5% 89.1% 85.63% 3.97%

 


2.2 LC-MS/MS
2.2.1雙氰胺的LC-MS/MS圖

2.2.2實(shí)際樣品基質(zhì)加標(biāo)的線性關(guān)系和檢出限
準(zhǔn)確稱取雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀釋至刻度,作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液;
分別稱取1g奶粉試樣,添加一定量標(biāo)準(zhǔn)溶液,配制成含雙氰胺為5ng/mL,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和200ng/mL的添加樣品,按照上述提取、凈化方法操作,所得凈化液按照上述液質(zhì)條件,依次進(jìn)樣檢測(cè)。以雙氰胺含量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),擬合線性方程,結(jié)果見表6:
表6 雙氰胺線性方程和定量限(LC-MS/MS法)
名稱 保留時(shí)間 線性方程 相關(guān)系數(shù) zui低定量限(S/N=10)
雙氰胺 2.25min Y=3859.1X+23694 0.9900 2ng/g
 

2.2.3準(zhǔn)確度和精密度
選取市售某嬰幼兒奶粉試樣,進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn),結(jié)果見表7。采用空白樣品稀釋法判斷檢測(cè)方法的基質(zhì)效應(yīng)影響??瞻變艋合♂尯鸵译嫦♂尩臉?biāo)準(zhǔn)溶液,雙氰胺峰面積和相對(duì)豐度比無明顯變化,故判斷該方法無基質(zhì)效應(yīng)的影響。

表7 10ng/g添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
平行1 平行2 平行3 平均值 RSD
82.5% 83.5% 89.3% 85.2% 4.31%

 


 
3.產(chǎn)品訂貨信息

相關(guān)方法:奶粉中雙氰胺的檢測(cè)方法(HPLC-UV和HPLC-MS/MS法)

產(chǎn)品名稱
規(guī)格型號(hào)
貨號(hào)
新一代
MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管(填料量加大,更適合嬰幼兒奶粉等復(fù)雜樣品)
500mg/15mL,50支/包  
MS-SQA02
MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管
100mg/2mL,50支/包  
MS-SQA01
Venusil HILIC液相色譜柱
4.6*250mm,5μm,100Å
VH952505-0
2.1*150mm,5μm,100Å
VH951502-0
Clarinert微孔濾膜
Nylon(通用)
尼龍0.22μm,直徑50mm, 100/Pk
AM025020
Clarinert 針式過濾器
Nylon(通用)
尼龍0.22um, 直徑13mm,200/pk
AS021320
雙氰胺對(duì)照品
500mg /瓶,含量≥99.0%   
DCD-0001
1g /瓶,含量≥99.0%   
DCD-0002
離心管
50mL,帶螺紋蓋,25個(gè)/包
LXG0050
一次性注射器
5mL,100/pk
 ZSQ-5ML

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