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chiral_agp 100.4操作說明
閱讀:4130發(fā)布時間:2011-7-21
CHIRAL-AGP 100.4操作說明
1、安裝
AGP100.4出貨溶劑為15%異丙醇蒸餾水溶液。先用蒸餾水沖洗,開始流速較低,然后慢慢增加到0.5ml/min,并維持2mins,隨后流速增加到0.8-0.9ml/min時保持10min,使用流動相平衡色譜柱,推薦流速為0.8-0.9ml/min。
為了保護分析柱不被高親和力和顆粒雜質(zhì)污染,推薦使用保護柱,且必須定期更換保護柱,否則將影響分析柱的性能,用于生物分析時尤為重要。
2、保存
色譜柱室溫保存。使用時,可以在色譜系統(tǒng)中過夜。但是當緩沖鹽中沒有有機改性劑,或者有機溶液中含有低濃度乙腈時,必須非常小心,因為在這樣的流動相中微生物生長迅速。所以流動相必須現(xiàn)場配制。周末或者短期保存,可將色譜柱置于10%異丙醇的蒸餾水中。長時間的保存,請保存在15%的異丙醇蒸餾水中,使用前,請重復操作上面的安裝步驟。
3、流動相組成
使用不同種類的緩沖液能得到的分離效果,比如:磷酸鈉或磷酸鉀緩沖液,乙酸銨或乙酸鈉緩沖液,甲酸甲酯或檸檬酸緩沖液。推薦濃度范圍0.01-0.1M,正常:10-20mM。
4、pH
色譜柱pH范圍:4-7,pH值長時間的大于7或者小于4,都可能縮短色譜柱壽命,導致二氧化硅分解。
5、有機改性劑
推薦使用下列有機改性劑:1-丙醇,異丙醇,甲醇,乙醇和乙腈,丙醇和異丙醇及乙腈是使用頻繁的有機改性劑。無電荷改進劑的類別和濃度對分離因子的影響很大。如:1-丙醇,異丙醇和乙腈在異構(gòu)體選擇性方面有很大的不同,見方法開發(fā)部分。使用陽離子和陰離子改性劑也能調(diào)整保留時間和異構(gòu)體選擇性。但是,由于對基體的高親和力,有些改性劑很難全部洗脫,這樣,可能影響色譜柱的性能。我們推薦使用無電荷的、陰離子的、陽離子的改性劑。
室溫范圍20-25℃,但是色譜柱也能在高于或低于該溫度下使用,然而當色譜柱使用溫度過高時,對所有硅膠基色譜柱,都將縮短色譜柱壽命。
6、樣品
當進樣針體積為10-20μL時,推薦的樣品濃度低于0.10mg/ml,如果可能,將樣品溶解在流動相中,如果樣品在流動相溶解性不好,加一些高濃度的有機溶劑改性劑,但是有機改性劑的濃度太高,小心引起緩沖鹽析出沉淀。避免將樣品溶在有機溶劑中。不要注射不干凈的樣品或者樣品中包含有未溶解化合物。在生物分析過程中,使用分離技術(shù)過濾樣品溶液,定期更換保護柱。
7、清洗色譜柱
如果色譜柱被疏水性原料污染了,將色譜柱反過來(不接檢測器),用25%的異丙醇蒸餾水溶液沖洗一個晚上,流速0.2ml/min。
8、方法開發(fā)(UV檢測器)
樣品特征和初的流動相 | |
化合物類型 | 初流動相 |
疏水性化合物 | 10mM醋酸銨或醋酸鈉緩沖液,pH4.5 |
親水胺,弱酸(苯酚等),非質(zhì)子類(胺,酯,醇等) | 5%的異丙醇10mM磷酸鈉緩沖液,pH7.0 |
強酸(羧酸) | 10mM磷酸鈉緩沖液,pH7.0 |
如果化合物包含一些官能團,按照質(zhì)子官能團確定使用下列哪種方法 |
疏水性胺:根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,請按下列流程
保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,無異構(gòu)體選擇性 |
pH值或無電荷改進劑的優(yōu)化。 | 逐漸增加pH值,用異丙醇調(diào)整保留時間, ↓ 檢測另一中無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 ↓ 測試低濃度質(zhì)子改進劑:辛酸1-20mM;己酸或庚酸1-20mM;四乙基胺或四丙基胺1-5mM。 | pH降低4,或增加異丙醇。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 | 測試不同的無質(zhì)子改進劑:異丙醇,乙腈,甲醇,丙醇,乙醇。 ↓ 測試低濃度質(zhì)子改進劑:辛酸1-20mM; 己酸或庚酸1-20mM;四乙基胺或四丙基胺1-5mM。 |
親水性胺,弱酸,非質(zhì)子化合物:根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,請按下列流程
保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,無異構(gòu)體選擇性 |
pH值或無電荷改進劑或緩沖鹽的優(yōu)化。 | 降低異丙醇的濃度。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 ↓ 胺:檢測低濃度質(zhì)子改進劑:辛酸1-20mM;己酸或庚酸1-20mM;四乙基胺或四丙基胺1-5mM。 | pH值逐漸減低,增加異丙醇的濃度。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 | 見疏水性胺的操作流程 |
強酸(如羧酸):根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,請按下列流程
保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,無異構(gòu)體選擇性 |
pH值或無電荷改進劑或緩沖鹽的優(yōu)化。 | 降低pH值,增加緩沖鹽濃度到50-75mM(高濃度100mM) ↓ 試試低濃度(1-5mM)質(zhì)子改進劑DMOA(N,N-二甲基辛胺) | 添加異丙醇 ↓ 檢測不同的無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 | 檢測不同的無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 ↓ 試試低濃度(1-5mM)質(zhì)子改進劑DMOA(N,N-二甲基辛胺) |
AGP方法開發(fā)(MS檢測器)
樣品特征和初的流動相 | |
化合物類型 | 初流動相 |
疏水性化合物 | 10mM醋酸銨緩沖液,pH4.5 |
親水胺,弱酸(苯酚等),非質(zhì)子類(胺,酯,醇等) | 5%異丙醇的10mM醋酸銨緩沖液,pH7.0 |
強酸(羧酸) | 10mM醋酸銨緩沖液,pH7.0 |
如果化合物包含一些官能團,按照質(zhì)子官能團確定使用下列哪種方法 |
疏水性胺:根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,請按下列流程
保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 異構(gòu)體選擇性低或沒有,保留時間低 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 保留時間高,無異構(gòu)體選擇性 |
pH值或無電荷改進劑的優(yōu)化。 | 逐漸增加pH值,用異丙醇調(diào)整保留時間,(濃度越低,選擇性越高) ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 ↓ 測試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進劑:TEA(三乙基胺)1-20mM | pH降低4,或增加異丙醇。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 | 測試不同的無質(zhì)子改進劑:異丙醇,乙腈,甲醇,丙醇,乙醇。 ↓ 測試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進劑:TEA(三乙基胺)1-20mM |
親水性胺,弱酸,非質(zhì)子化合物:根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,請按下列流程
保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,無異構(gòu)體選擇性 |
pH值或無電荷改進劑或緩沖鹽的優(yōu)化。 | 降低異丙醇的濃度。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 ↓ 胺:檢測低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進劑:TEA(三乙基胺)1-20mM | pH值逐漸減低,增加異丙醇的濃度。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 | 見疏水性胺的操作流程 |
強酸(如羧酸):根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,請按下列流程
保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,無異構(gòu)體選擇性 |
pH值或無電荷改進劑或緩沖鹽的優(yōu)化。 | 降低pH值,增加緩沖鹽濃度到50-75mM(高濃度100mM) ↓ 測試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進劑 | 添加異丙醇 ↓ 測試不同的無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 | 測試不同的無質(zhì)子改進劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇 ↓ 測試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進劑 |
9、保護柱的使用
為了保護分析柱不被高親和力和顆粒雜質(zhì)污染,推薦使用保護柱,且必須定期更換保護柱,否則將影響分析柱的性能,用于生物分析時尤為重要。
CHIRAL-AGP,CHIRAL-CBH,CHIRAL-HSA,均能提供保護柱
10、選擇適當?shù)谋Wo柱
為了優(yōu)化色譜系統(tǒng)性能,保護柱的內(nèi)徑必須和分析柱的內(nèi)徑相匹配,每種色譜柱的保護柱內(nèi)徑必須和分析柱相匹配,標準的保護柱套CH10.3,適合所有內(nèi)徑的保護柱芯(2,3和4mm)
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