UHPLC/HPLC的 SEC色譜柱TSK UP-SW3000

UHPLC/HPLC的 SEC色譜柱TSK UP-SW3000 TSKgel UP-SW3000 色譜柱采用粒徑為2 μm，鍵合了二醇基的硅膠顆粒充填。是一款用于生物大分子分離用的尺寸排阻色譜分析柱。填料粒徑為2 µm，適合用于蛋白質(zhì)、抗體、酶等生物大分子的快速分析（15 cm 規(guī)格柱）以及高分辨率分析（30 cm 規(guī)格柱）。 與現(xiàn)有產(chǎn)品TSKgel SW系列色譜柱具有相同的填料表面特性。? 填料的特性（孔隙容量、校正曲線的斜率）與TSKgel G3000SL 相同，所以非常適合用來(lái)分離抗體（IgG）的二聚體、單體、抗體片段。兩種色譜柱尺寸可供選擇：

• 4.6 mm I.D. x 15 cm 的規(guī)格可用于超高速的分離。

• 4.6 mmI.D. x 30 cm 的規(guī)格可用于超高分辨率的分析。

• 可同時(shí)兼容于UHPLC和HPLC系統(tǒng)

• 必須使用半微型液相系統(tǒng)，即，較小死體積的液相系統(tǒng)才能實(shí)現(xiàn)較為理想的色譜柱性能。

（separate report ）抗體藥物中使用的單克隆抗體，在生產(chǎn)、貯藏或運(yùn)輸過程中可能會(huì)形成二聚體等凝聚物，存在引發(fā)不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)因素，故在質(zhì)量控制中采用體積排阻色譜法（SEC）對(duì)單克隆抗體進(jìn)行分離分析。現(xiàn)有的 TSKgel G3000SL 色譜柱常用于此用途，但仍需要更高分離度以及更短分析時(shí)間的SEC 分析技術(shù)?，F(xiàn)在 2μm 粒徑的高性能 SEC 色譜柱TSKgel UP-SW3000 已實(shí)現(xiàn)了商品化。在本報(bào)告中，介紹了 TSKgel UP-SW3000 色譜柱的基本特性及其分離實(shí)例。

UHPLC/HPLC的 SEC色譜柱TSK UP-SW3000

填料的特性

表 1 所示為 TSKgel UP-SW3000 色譜柱的填料特性、色譜柱規(guī)格，以及與常用于抗體分離的現(xiàn)有 SW 型色譜柱的性能對(duì)比。TSKgel UP-SW3000 色譜柱是以 25nm 孔徑硅膠表面導(dǎo)入二醇基后形成的 2μm 微粒為填料的色譜柱。與現(xiàn)有 SW 型色譜柱相比，具有更高的分離性能，適用于抗體二聚體及單體的分離。

表 1：填料特性、色譜柱規(guī)格

標(biāo)準(zhǔn)曲線和分離性能

使用 TSKgel UP-SW3000、TSKgel SuperSW3000（4μm）及 TSKgel G3000SL（5 μm）測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的色譜圖對(duì)比如圖 1 所示，采用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)制成的校正曲線對(duì)比如圖 2 所示。具有相同孔徑特性的 TSKgel UP-SW3000、TSKgel SuperSW3000 及 TSKgel G3000SL 中，甲狀腺球蛋白的二聚體及多聚體不會(huì)滲入小孔內(nèi)而排出，進(jìn)入間隙體積（V0）（圖 1），校正曲線的斜率相同（圖 2）。表 2所示為樣品核糖核酸酶 A 的理論塔板數(shù)。粒徑較小的TSKgel UP-SW3000 比其他色譜柱的理論塔板數(shù)更高。圖 3 所示為使用 TSKgel UP-SW3000、TSKgel SuperSW3000、及 TSKgel G3000SL 分離單克隆抗體的色譜圖對(duì)比，表 3 所示為各溶出峰分離度（R）的對(duì)比。粒徑較小的 TSKgel UP-SW3000 比其他色譜柱的分離度更高。（separate report）

TSKgel Amide-80 2um：在原有產(chǎn)品Amide-80系列色譜柱基礎(chǔ)上，采用小粒徑2 µm填料充填的HILIC色譜柱。適用于對(duì)糖類、多肽、核酸等親水性化合物的分離分析。