高效篩選抗體ADCC活性色譜柱

TSKgel FcR-IIIA-NPR——高效篩選抗體ADCC活性色譜柱

在單克隆抗體藥物的初期研發(fā)階段中，通過(guò)對(duì)細(xì)胞株實(shí)施篩選，選出能產(chǎn)生滴度較高、ADCC活性較高的細(xì)胞株。此時(shí)常會(huì)用到的幾種評(píng)估方法是，通過(guò)生物檢定法測(cè)定ADCC活性；通過(guò)表面等離子共振法（SPR）測(cè)定人體IgG受體（FcγⅢa等）的親和力；通過(guò)LC/MS分析抗體酶切下來(lái)的糖鏈結(jié)構(gòu)等。但這些方法都需要花費(fèi)大量的時(shí)間和人力。

能夠把這些復(fù)雜的評(píng)估分析法由繁化簡(jiǎn)，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。

使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體，無(wú)需對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行前處理。抗體主要可以分離出3個(gè)洗脫峰。已有研究表明，抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多，在此色譜柱中的保留能力越強(qiáng)，而保留能力越強(qiáng)的洗脫峰，其ADCC活性就越高。

細(xì)胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離

TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來(lái)測(cè)定和監(jiān)控細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)液，使用Protein A填料對(duì)抗體樣品粗純后，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結(jié)果如圖所示。

抗體細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)和產(chǎn)生抗體的變化

高效篩選抗體ADCC活性色譜柱

隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長(zhǎng)，抗體的3個(gè)洗脫峰會(huì)向前側(cè)的洗脫峰位移。雖然延長(zhǎng)了細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)，抗體的絕對(duì)產(chǎn)量增加，但是由于受到細(xì)胞外糖鏈修飾酶的影響，在色譜柱中的保留能力較高的抗體（多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體）的洗脫峰反而減少了。因此，可以推定產(chǎn)生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低。

TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途

①確認(rèn)不同細(xì)胞株 (CHO細(xì)胞、HEK細(xì)胞等) 中抗體的性狀變化。

②確認(rèn)多個(gè)細(xì)胞株篩選時(shí)抗體的性狀變化。

③確認(rèn)當(dāng)改變細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑時(shí)抗體的性狀變化

④細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導(dǎo)致抗體性狀變化的確認(rèn)。

⑤細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模放大 (更改培養(yǎng)方法) 時(shí)，確認(rèn)抗體是否發(fā)生性狀變化。

北京綠百草科技發(fā)展有限公司成立于1999年，坐落于北京市昌平區(qū)企業(yè)墅上區(qū)，是一家專業(yè)經(jīng)營(yíng)純化填料、色譜柱、化學(xué)試劑和實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及相關(guān)技術(shù)服務(wù)的科技型企業(yè)，產(chǎn)品主要應(yīng)用于制藥、生物、食品、環(huán)境和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。憑借較好的產(chǎn)品和服務(wù)，綠百草科技與廣大客戶建立了長(zhǎng)期穩(wěn)定的戰(zhàn)略合作關(guān)系，被眾多企業(yè)和科研機(jī)構(gòu)認(rèn)定為“供應(yīng)商"，得到了政府部門的關(guān)懷和有力支持。

經(jīng)過(guò)十多年的快速發(fā)展，綠百草科技創(chuàng)建了產(chǎn)品種類齊全、技術(shù)服務(wù)的色譜耗材平臺(tái)。綠百草科技被眾多國(guó)際供應(yīng)商選擇為他們?cè)谥袊?guó)區(qū)的代理，包括

美國(guó)Restek公司、美國(guó)Zymo Research生物科技公司、日本三菱化學(xué)株式會(huì)社、加拿大SiliCycle股份有限公司、日本GL Sciences株式會(huì)社、美國(guó)Benson聚合物股份有限公司、日本東洋曹達(dá)株式會(huì)社、日本大賽璐化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社、日本Nacalai Tesque株式會(huì)社、日本信和化工株式會(huì)社、日本住化分析株式會(huì)社等。同時(shí)，還提供美國(guó)USP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)EDQM、英國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)LGC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、加拿大TRC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等。目前，綠百草科技已成為國(guó)內(nèi)制藥、生物、食品、環(huán)境和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的較大供應(yīng)商之一。