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技術(shù)文章
三聚氰胺的快速檢測
點擊次數(shù)：1245 發(fā)布時間：2008-9-24
三聚氰胺的快速檢測
三聚氰胺簡稱三胺、氰脲酰胺，是一種用途廣泛的具有氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)的有機(jī)化工原料，因其結(jié)構(gòu)中還有多個氨基氮，而目前對蛋白的定量主要依靠凱式定氮，因而三聚氰胺被一些不法商販添加到蛋白中以提高蛋白檢測中氮的含量。2007年3月美國發(fā)生的貓狗寵物非正常死亡事件以及zui近國內(nèi)的奶粉事件都是由此造成的。目前，檢測三聚氰胺的主要方法是HPLC、LC-MS、GC-MS，但對儀器及實驗室要求較高，樣品處理和操作也相對要求較高。相對而言，檢測試劑盒操作方便，且不需要大筆的儀器投入，同時也具有很好的靈敏度。這類試劑盒多采用直接競爭性酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)， 對UD和60%甲醇兩種方法處理樣品所獲得的三聚氰胺萃取液進(jìn)行免疫測定可以獲得相同的結(jié)果，可用來定量檢測被污染樣品中的三聚氰胺。
檢測原理：三聚氰胺檢測試劑盒是競爭性酶聯(lián)免疫反應(yīng)。三聚氰胺從樣品中萃取出來。三聚氰胺-HRP，樣品萃取液和標(biāo)準(zhǔn)品一起加入包備有三聚氰胺抗體的微孔中發(fā)生反應(yīng)，經(jīng)過30分鐘的培養(yǎng)，樣品中的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP與三聚氰胺抗體競爭性結(jié)合，任何沒有結(jié)合的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP將被沖洗掉，顯色酶底物加入微孔中，任何結(jié)合的三聚氰胺-HRP都會使液體現(xiàn)藍(lán)色。20分鐘后終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀數(shù)。將未知樣品的讀數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)比較就能得出樣品中的三聚氰胺濃度。
檢測原理：三聚氰胺檢測試劑盒是競爭性酶聯(lián)免疫反應(yīng)。三聚氰胺從樣品中萃取出來。三聚氰胺-HRP，樣品萃取液和標(biāo)準(zhǔn)品一起加入包備有三聚氰胺抗體的微孔中發(fā)生反應(yīng)，經(jīng)過30分鐘的培養(yǎng)，樣品中的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP與三聚氰胺抗體競爭性結(jié)合，任何沒有結(jié)合的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP將被沖洗掉，顯色酶底物加入微孔中，任何結(jié)合的三聚氰胺-HRP都會使液體現(xiàn)藍(lán)色。20分鐘后終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀數(shù)。將未知樣品的讀數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)比較就能得出樣品中的三聚氰胺濃度。
實驗所需儀器設(shè)備及材料：
1.去離子水或蒸餾水（ZealPure）
2.20-200ul的單道微量加樣槍(NPX-200)
3.50-20000ul的8道微量加樣槍(00-NP7-8L)
4.酶標(biāo)儀(405nm)(BioTek ELx800)
5.計時器(Casio)
6.洗瓶(Nalgene)
1.去離子水或蒸餾水（ZealPure）
2.20-200ul的單道微量加樣槍(NPX-200)
3.50-20000ul的8道微量加樣槍(00-NP7-8L)
4.酶標(biāo)儀(405nm)(BioTek ELx800)
5.計時器(Casio)
6.洗瓶(Nalgene)
檢測程序：
1.所有試劑恢復(fù)到室溫，洗瓶裝好去離子水；
2.準(zhǔn)備好所需要的微孔條；
3.加100µL各個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后樣品提取物到小孔，加50µL三聚氰胺-HRP；
4.輕微震蕩60秒，培養(yǎng)30分鐘；
5.倒掉小孔中液體，用移液器加水至小孔，倒掉液體。再重復(fù)操作3遍；
6.每個小孔加100µL底物；
7.培養(yǎng)20分鐘；
8.每個小孔加100µL終止液；
9.于酶標(biāo)儀450nm讀數(shù)。
結(jié)果解釋：
1.半定量可以由樣品的吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值的比較得出。樣品顏色比標(biāo)準(zhǔn)品顏
2.準(zhǔn)備好所需要的微孔條；
3.加100µL各個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后樣品提取物到小孔，加50µL三聚氰胺-HRP；
4.輕微震蕩60秒，培養(yǎng)30分鐘；
5.倒掉小孔中液體，用移液器加水至小孔，倒掉液體。再重復(fù)操作3遍；
6.每個小孔加100µL底物；
7.培養(yǎng)20分鐘；
8.每個小孔加100µL終止液；
9.于酶標(biāo)儀450nm讀數(shù)。
結(jié)果解釋：
1.半定量可以由樣品的吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值的比較得出。樣品顏色比標(biāo)準(zhǔn)品顏
色淺的話，樣品中三聚氰胺濃度比標(biāo)準(zhǔn)品濃度高，樣品顏色比標(biāo)準(zhǔn)品顏色深的話，三聚氰胺濃度比標(biāo)準(zhǔn)品濃度低。
2.定量可由標(biāo)準(zhǔn)曲線圖得出，用樣品的吸光作X軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)值作Y軸。Y
2.定量可由標(biāo)準(zhǔn)曲線圖得出，用樣品的吸光作X軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)值作Y軸。Y
軸上的相應(yīng)的點乘以相應(yīng)的稀釋度就是樣品的濃度。