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軟骨素酶ABC酶解--液相色譜法測定魚翅中的透明質(zhì)酸

時間：2012/8/6閱讀：3777
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1.儀器與試劑

配置紫外可見檢測器的HP-1100型液相色譜儀（美國惠普公司）；DU-600型紫外掃描儀（瑞士Beckman公司）；透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸二糖、三羥甲基氨基甲烷（Tris）、膠原酶、木瓜蛋白酶、軟骨素酶ABC均為Sigman產(chǎn)品；乙腈為色譜純；二次蒸餾水；其他所用試劑均為分析純。

2.色譜條件

色譜柱： ZORBAX 糖分析柱（4.6mmi.d. x 250mm, 5µm）；檢測器及檢測波長：紫外可見檢測器，226nm；流動相V（乙腈）:V（0.5%磷酸）=2:98；用0.45µm濾膜抽吸過濾；進樣量10µL；流速1ml／min；室溫下分析。

3.溶液的配制

透明質(zhì)酸二糖標準儲備液的配制：準確稱取標準品，用0.2mol<LTris-HCl（Ph8.0）緩沖溶液溶解，稀釋定容為1g／L的標準貯備液，于冰箱中存放。實驗時，其他濃度的標準液均由此溶液用0.2mol／L Tris-HCl（Ph8.0）稀釋而成。其他所用溶液均按常規(guī)方法配制而成。

 

 

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