選擇系列液相色譜柱不要被人騙了哦！

色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成，壓力不高于70 kg/cm2 時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效，減小管壁效應(yīng)，不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度，其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的，用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板，是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金，孔徑0.2~20µm（5~10µm），取決于填料粒度，目的是防止填料漏出。

色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類，尺寸規(guī)格也不同：

·         ①常規(guī)分析柱（常量柱），內(nèi)徑2~5mm（常用4.6mm，國內(nèi)有4mm和5mm），柱長10~30cm；

·         ②窄徑柱（narrow bore，又稱細(xì)管徑柱、半微柱semi-microcolumn），內(nèi)徑1~2mm，柱長10~20cm；

·         ③毛細(xì)管柱（又稱微柱microcolumn），內(nèi)徑0.2~0.5mm；

·         ④半制備柱，內(nèi)徑＞5mm；

·         ⑤實(shí)驗(yàn)室制備柱，內(nèi)徑20~40mm，柱長10~30cm；

·         ⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定，目的是為了避免管壁效應(yīng)。

2、流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動(dòng)相中顆粒對(duì)色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應(yīng)重新過濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5％的有機(jī)溶劑沖洗色譜柱，同時(shí)可以達(dá)到對(duì)緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。

3、流動(dòng)相需脫氣后使用，可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區(qū)別，應(yīng)該使用過度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過大或流動(dòng)相緩沖鹽結(jié)晶造成對(duì)色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時(shí)間。

1、樣品應(yīng)當(dāng)盡可能溶解在能與流動(dòng)相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強(qiáng)溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。

2、樣品溶液在進(jìn)樣前應(yīng)使用針頭式過濾器對(duì)樣品預(yù)先過濾。頻繁改變流動(dòng)相組成，會(huì)加速降低柱效。

3、色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得更佳分離效果，使用時(shí)請(qǐng)不要超過200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會(huì)造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外更高操作溫度不要超過60℃。

2、應(yīng)避免色譜柱受到直接的機(jī)械沖擊或摔落，避免造成色譜柱性能的降低。

因強(qiáng)調(diào)分析速度而發(fā)展出短柱，柱長3~10cm，填料粒徑2~3µm。為提高分析靈敏度，與質(zhì)譜（MS）聯(lián)接，而發(fā)展出窄徑柱、毛細(xì)管柱和內(nèi)徑小于0.2mm的微徑柱（microbore）。細(xì)管徑柱的優(yōu)點(diǎn)是：①節(jié)省流動(dòng)相；②靈敏度增加；③樣品量少；④能使用長柱達(dá)到高分離度；⑤容易控制柱溫；⑥易于實(shí)現(xiàn)LC-MS聯(lián)用。
　　但由于柱體積越來越小，柱外效應(yīng)的影響就更加顯著，需要更小池體積的檢測器（甚至采用柱上檢測），更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設(shè)備應(yīng)具備如下性能：輸液泵能精密輸出1~100µl/min的低流量，進(jìn)樣閥能準(zhǔn)確、重復(fù)地進(jìn)樣微小體積的樣品。且因上樣量小，要求高靈敏度的檢測器，電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜儀在這方面具有突出優(yōu)點(diǎn)。

　色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外，還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下，填料粒度＞20µm時(shí)，干法填充制備柱較為合適；顆粒＜20µm時(shí)，濕法填充較為理想。填充方法一般有4種：①高壓勻漿法，多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充；②徑向加壓法，Waters；③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱；④干法。柱填充的技術(shù)性很強(qiáng)，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用已填充好的商品柱。
　　必須指出，液相色譜柱的獲得，裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié)，但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣，以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結(jié)構(gòu)是否合理。
　　無論是自己裝填的還是購買的色譜柱，使用前都要對(duì)其性能進(jìn)行考察，使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查。柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件下（樣品、流動(dòng)相、流速、溫度）下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對(duì)稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性，或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復(fù)性在±5%或±10%以內(nèi)。進(jìn)行柱效比較時(shí)，還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。
　　一份合格的色譜柱評(píng)價(jià)報(bào)告應(yīng)給出柱的基本參數(shù)，如柱長、內(nèi)徑、填料的種類、粒度、色譜柱的柱效、不對(duì)稱度和柱壓降等。

色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。
　　①　避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩（如前所述）。
　　②　應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/span>
　　③　一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
　　④　選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
　　⑤　避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
　　⑥　經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
　　下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略更后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇（乙腈）沖洗時(shí)重復(fù)注射100~200µl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強(qiáng)疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。
　　陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強(qiáng)的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機(jī)物）、甲醇、水依次沖洗。
　　⑦　保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間。
　　⑧　色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
　　在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。
　　柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護(hù)、延長柱壽命的作用。采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效，這是值得的。
　　通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達(dá)2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀Ｐ碌纳V柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。
　　每次工作完后，更好用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機(jī)沖洗15分鐘。

科技有限公司是一家多元化的高科技跨國公司，它于1999年從惠普研發(fā)有限合伙公司分離出來，主要致力于通訊和生命科學(xué)兩個(gè)領(lǐng)域內(nèi)產(chǎn)品的研制開發(fā)、生產(chǎn)銷售和技術(shù)服務(wù)等工作。
　　科技有限公司是分析儀器系統(tǒng)的領(lǐng)導(dǎo)供應(yīng)商，其產(chǎn)品正在化學(xué)、環(huán)保、食品、醫(yī)藥和生命科學(xué)領(lǐng)域中廣泛使用。具有世界更先進(jìn)的化學(xué)分析儀器，豐富的法規(guī)適應(yīng)性和專業(yè)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，以及優(yōu)良的支持服務(wù)系統(tǒng)，這些都能夠幫助您的實(shí)驗(yàn)室超前應(yīng)對(duì)分析的挑戰(zhàn)。
　　創(chuàng)始人 威廉·休利特和戴維·帕卡德
　　年凈收入 51億美元（？年）
　　員工人數(shù) 20,000（？年）
　　總裁兼執(zhí)行官 邵律文[William P. （Bill） Sullivan]
　　總部所在地 美國加利福尼亞州 Santa Clara
　　電子測量
　　　的電子測量業(yè)務(wù)為客戶提供量身定制的、標(biāo)準(zhǔn)的電子電子測量儀器和系統(tǒng)，通信網(wǎng)絡(luò)和服務(wù)的監(jiān)測、管理和優(yōu)化工具，以及用于電子設(shè)備和通信網(wǎng)絡(luò)和服務(wù)設(shè)計(jì)、開發(fā)、制造、安裝、部署和運(yùn)營方面的軟件設(shè)計(jì)工具和相關(guān)服務(wù)。截至2005年10月31日，我們?cè)陔娮訙y量業(yè)務(wù)領(lǐng)域的員工約為11,500。
　　市場：的電子測量業(yè)務(wù)所涉及的市場包括通信測試和綜合測試。
　　產(chǎn)品領(lǐng)域：通信測試產(chǎn)品包括為下列類型的網(wǎng)絡(luò)和系統(tǒng)提供的產(chǎn)品：光線網(wǎng)絡(luò)、傳輸網(wǎng)絡(luò)、寬帶和數(shù)據(jù)網(wǎng)絡(luò)、無線通信和微波網(wǎng)絡(luò)。還對(duì)安裝、維護(hù)和運(yùn)營支持系統(tǒng)提供幫助。綜合測試產(chǎn)品包括綜合儀器、模塊儀器和測試軟件、數(shù)字設(shè)計(jì)產(chǎn)品、參數(shù)測試產(chǎn)品、高頻電子設(shè)計(jì)工具、電子制造測試設(shè)備和薄膜電晶體陣列測試設(shè)備。
　　生物分析測量
　　的生物分析測量業(yè)務(wù)提供以應(yīng)用為中心的解決方案，其中包括能夠讓用戶識(shí)別、量化和分析物質(zhì)和產(chǎn)品的物理和化學(xué)屬性的儀器、軟件、耗材和服務(wù)。截至2005年10月31日，我們?cè)谏锓治鰷y量業(yè)務(wù)領(lǐng)域的員工約為4,000名。
　　市場：生物分析測量業(yè)務(wù)所涉及的市場包括生命科學(xué)，其中包括藥物分析、基因表達(dá)和蛋白質(zhì)組市場，以及化學(xué)分析，其中包括石化、環(huán)保、國土安全、法醫(yī)、生物農(nóng)業(yè)以及食品安全市場。
　　產(chǎn)品領(lǐng)域：生物分析測量業(yè)務(wù)的七大主要產(chǎn)品包括：微陣列、微流體、氣相色譜、液相色譜、質(zhì)譜、軟件和信息學(xué)、以及相關(guān)耗材、試劑和服務(wù)。
　　實(shí)驗(yàn)室
　　實(shí)驗(yàn)室是的中心研究機(jī)構(gòu)，總部位于美國加利福尼亞州Santa Clara，并在中國北京、美國華盛頓州Everett、比利時(shí)Leuven、以及英國蘇格蘭South Queensferry設(shè)有分支機(jī)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)室主要致力于從事兩大類型的研究：
　　1）針對(duì)能夠轉(zhuǎn)化為我們?cè)谕ㄐ?、電子、生命科學(xué)和化學(xué)分析領(lǐng)域的現(xiàn)有業(yè)務(wù)的技術(shù)而進(jìn)行的應(yīng)用型研究
　　2）針對(duì)創(chuàng)造在我們目前的市場之外，但屬于我們所關(guān)心領(lǐng)域的新業(yè)務(wù)而進(jìn)行的研究。實(shí)驗(yàn)室同時(shí)也提供跨公司各個(gè)部門的技術(shù)整合。
　　銷售和支持
　　主要通過直銷的方式銷售產(chǎn)品，但也同時(shí)通過分銷商、轉(zhuǎn)銷商、制造商代表、銷售和電子商務(wù)的方式進(jìn)行銷售。

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