液相色譜法檢測(cè)牛奶分析研究

隨著抗生素在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中的廣泛應(yīng)用，牛奶中抗生素殘留問(wèn)題日趨受到社會(huì)的重視。對(duì)此，檢測(cè)技術(shù)也迅速發(fā)展，以尋求簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、敏感性高的檢測(cè)方法滿足日趨嚴(yán)格的殘留*的要求，保障人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全?！　?　　

    1 牛奶中抗生素殘留的來(lái)源及其危害

1 .1牛奶中抗生素殘留的危害 　　 　　
    牛奶是老少皆宜的營(yíng)養(yǎng)品，牛奶中若含有抗生素，對(duì)長(zhǎng)期飲用者來(lái)說(shuō)無(wú)疑是等于長(zhǎng)期服用小劑量的抗生素，對(duì)抗生素有過(guò)敏體質(zhì)的人服用殘留抗生素的乳后會(huì)發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)。即使是正常飲用者，體內(nèi)的某些條件性致病菌易產(chǎn)生耐藥性，一旦患者再用同種抗生素治療很難奏效。

    這又促使臨診獸醫(yī)在治療過(guò)程中加大抗生素的用量。此外，牛奶中抗生素殘留會(huì)影響奶制品的品質(zhì)，如果用含抗生素的奶做酸奶或乳酪等，則殘留在其中的抗生素會(huì)抑制細(xì)菌的發(fā)酵，使產(chǎn)量和質(zhì)量降低。因此市場(chǎng)不允許出售抗生素殘留過(guò)量的牛奶，這樣也造成牛奶生產(chǎn)者的經(jīng)濟(jì)損失。　　　　
    1.2 牛奶中抗生素殘留的來(lái)源 　　 　　
    一般認(rèn)為，對(duì)泌乳牛用藥不當(dāng)或不注意安全時(shí)間是牛乳中抗生素殘留的重要因素，尤其是使用乳房灌注法治療乳腺炎時(shí)，易造成牛乳中抗生素殘留。隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，在牛飼料中添加飼料添加劑已十分廣泛，其中含量有一定比例的抗生素，主要作用是預(yù)防疾病的發(fā)生，這也是牛乳抗生素殘留重要原因。此外，在高溫季節(jié)，一些不法交奶戶為防止乳的酸敗，往往向牛乳中摻雜各種抗生素，這也是乳中抗生素殘留的一個(gè)來(lái)源?！　?br />　
    2 牛奶中的抗生素殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展 　　
    2.1微生物檢測(cè)法 　　
    微生物檢測(cè)法是應(yīng)用較廣泛的方法，如紙片法、TTC法等等，因其測(cè)定原理基于抗生素對(duì)微生物的生理機(jī)能、代謝的抑制作用，因而與臨床應(yīng)用的要求一致，但其測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)且結(jié)果誤差較大。目前趨向靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的微生物檢測(cè)方法研究，如酶標(biāo)抗體檢測(cè)法等?！　?br />    2.1.1紙片法 　　
    紙片法，即PD法（Paper Disc）。常用的紙片法有枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片檢測(cè)法。這兩種方法主要用來(lái)檢測(cè)牛奶中的β-內(nèi)酰胺類抗生素，其操作過(guò)程基本相同，而選用的菌種不同?？莶輻U菌紙片法檢測(cè)的結(jié)果易出現(xiàn)假陽(yáng)性，為了確定陽(yáng)性物質(zhì)是否為青霉素（或β-內(nèi)酰胺類），對(duì)加熱后的乳樣用青霉素酶處理，以滅活乳樣中的青霉素。然后再行檢測(cè)，檢測(cè)限可達(dá)0.01IU/mL。而嗜熱脂肪桿菌紙片檢測(cè)法不僅用于檢測(cè)奶樣中β-內(nèi)酰胺類抗生素，并能暗示是還存在其他抑菌物質(zhì)，檢測(cè)限可達(dá)0.008IU/mL以下。一般在4h內(nèi)即可獲得有關(guān)乳中是還存在β-內(nèi)酰胺抗生素殘留的結(jié)果。因此，在實(shí)踐中，嗜熱脂肪桿菌紙片法在奶樣的檢測(cè)中比枯草桿菌紙片法應(yīng)用更為廣泛。1991年，神保勝?gòu)?duì)紙片法作了進(jìn)一步研究和改進(jìn)。改進(jìn)后的方法不僅能夠確定抗生素的種類，而且提高了檢出率和準(zhǔn)確率，對(duì)氯霉素更低檢出量0.01ppm，土霉素0.05ppm，鏈霉素1ppm，紅霉素0.05ppm，青霉素0.0025ppm?！?br />    2.1.2 TTC法 　　
    TTC法，即氯化三苯基四氮唑法（ tripheye tetrazolium chloride），這是目前我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)淮中規(guī)定的檢查牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)方法（GB5409?85）。如果牛乳中有抗生素存在，當(dāng)乳中加入菌種（嗜熱鏈球菌）經(jīng)培養(yǎng)后，菌種不增殖，此時(shí)加入的TTC指示劑不發(fā)生還原反應(yīng)，所以仍呈無(wú)色狀態(tài)；如果沒(méi)有抗生素存在，則加入菌種即行增殖，TTC還原變成紅色，使樣品染成紅色，即牛乳的顏色不變?yōu)殛?yáng)性，染成紅色為陰性。檢測(cè)各種抗生素的靈敏度（更低檢出量）：青霉素0.004U/ml，鏈霉素0.5 U/ml，慶大霉素0.4 U/ml，卡那霉素5 U/ml。 　　
    一些文獻(xiàn)報(bào)道了我國(guó)標(biāo)TTC法測(cè)定的我國(guó)部分地區(qū)市售牛乳中抗生素殘留的情況。1988年，周樹南[6]對(duì)江蘇省8市10個(gè)牧場(chǎng)生奶、消毒牛奶和奶粉中抗生素殘留情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)生奶陽(yáng)性率3.6%，消毒牛奶11.4%，奶粉39.58%。