關于液相色譜法的介紹

液相色譜法（HPLC）是20世紀60年代末70年代初發(fā)展起來的一種新型分離分析技術，隨著不斷改進與發(fā)展，目前已成為應用極為廣泛的化學分離分析的重要手段。它是在經(jīng)典液相色譜基礎上，引入了氣相色譜的理論，在技術上采用了高壓泵、固定相和高靈敏度檢測器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動化的特點。為了更好地了解液相色譜法*性，現(xiàn)從兩方面進行比較：

1.液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法

液相色譜法比起經(jīng)典液相色譜法的更大優(yōu)點在于高速、、高靈敏度、高自動化。高速是指在分析速度上比經(jīng)典液相色譜法快數(shù)百倍。由于經(jīng)典色譜是重力加料，流出速度極慢；而液相色譜配備了高壓輸液設備，流速更高可達 10³cm·min^-1.例如分離苯的羥基化合物，7個組分只需1min就可完成。對氨基酸分離，用經(jīng)典色譜法，柱長約170cm，柱徑0.9cm，流動相速度為30cm³·h^-1，需用20多小時才能分離出20種氨基酸；而用液相色譜法，只需lh之內(nèi)即可完成。又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS（5μ）的柱，采用梯度洗脫，可在不到0.5h內(nèi)分離出尿中104個組分.

2.液相色譜法與氣相色譜法

（l）氣相色譜法分析對象只限于分析氣體和沸點較低的化合物，它們僅占有機物總數(shù)的20％。對于占有機物總數(shù)近80％的那些高沸點、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)，目前主要采用液相色譜法進行分離和分析。

 （2）氣相色譜采用流動相是惰性氣體，它對組分沒有親和力，即不產(chǎn)生相互作用力，僅起運載作用。而液相色譜法中流動相可選用不同極性的液體，選擇余地大，它對組分可產(chǎn)生一定親和力，并參與固定相對組分作用的劇烈競爭。因此，流動相對分離起很大作用，相當于增加了一個控制和改進分離條件的參數(shù)，這為選擇更佳分離條件提供了極大方便。

（3）氣相色譜一般都在較高溫度下進行的，而液相色譜法則經(jīng)?？稍谑覝貤l件下工作。

      總之，液相色譜法是吸取了氣相色譜與經(jīng)典液相色譜優(yōu)點，并用現(xiàn)代化手段加以改進，因此得到迅猛的發(fā)展。目前液相色譜法已被廣泛應用于分析對生物學和醫(yī)藥上有重大意義的大分子物質(zhì)，例如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、多糖類、植物色素、高聚物、染料及藥物等物質(zhì)的分離和分析。

       液相色譜法的儀器設備費用昂貴，操作嚴格，這是它的主要缺點。

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