ELISA常見問題和處理

問題  可能原因 解決方法
1、無顏色  試劑孵育的時間沒有按說明書操作。  確定生物素化抗體，連接的HRP試劑或鏈霉親和素-HRP使用的時間是否適當。
2、不同試劑盒或不同批號的試劑混用。 重新檢查試劑的標簽，確準所有組分都屬于正使用的試劑盒中的。不能混用不同試劑盒或不同批號的試劑。
3、漏加酶  檢查操作流程，注意不要漏加
4、HRP酶污染了疊氮鈉  使用新配制的試劑，禁含疊氮鈉  標準品有問題(若在標本孔中有信號) 按說明書檢查標準品的制備使用1瓶新標準品    
某一容器未洗凈,殘留滅活酶物質(zhì)  
盡可能用試劑盒內(nèi)容器,另覓一定要潔凈、可靠使用含血清的緩沖液配制/復溶抗體 重新確認所選用的試劑    .
漏加顯色劑A或B  
加顯色劑后觀察一下液面高度    
試劑配制/使用有誤  
將實驗重做；嚴格按說明書操作，每次配制和使用前看清標簽。    
緩沖液污染  
配制新新鮮的緩沖液    
顯色弱  
超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號。
檢查產(chǎn)品的有效期    
加入試劑的體積和時間有誤
確定所使用的每一個試劑的體積正確的和加入的時間是適當?shù)摹? 
試劑、樣品用前未能平衡  用前試劑、樣品置室溫平衡10分鐘左右