PCR在臨床中的應(yīng)用（二）

1、檢測甲型病毒性肝炎

 HAV為甲型病毒性肝炎的病原體。甲型肝炎病毒為嗜肝RNA病毒?？?HAV IgM和抗-HAV IgG等抗體成分為其血清標(biāo)志物。[臨床意義]  血液中抗-HAV IgM型抗體在發(fā)病后1~2周內(nèi)出現(xiàn)，3個月后滴度下降，6個月后不易檢出， 該抗體陽性，即可診斷為急性甲型肝炎?？?HAV IgG出現(xiàn)較抗-HAV IgM稍晚，一般終身存在，是一種保護(hù)性抗體，可用于甲肝的流行病學(xué)調(diào)查。

 2、檢測戊型肝炎病毒

是一種RNA病毒。臨床診斷HEV的血清標(biāo)志物為抗- HEV IgM 和抗- HEV IgG。 健康人檢查結(jié)果均為陰性。 抗- HEV IgM 陽性反應(yīng)，可診斷急性戊肝，持續(xù)時間2~3個月。恢復(fù)期患者血清中可檢出抗- HEV IgG，持續(xù)時間約1年。

 3、檢測丁型肝炎病毒

是一種RNA病毒。臨床診斷HDV的血清標(biāo)志物為HDV Ag、抗- HDV IgM 和抗- HDV IgG 等三種。 健康人檢查結(jié)果均為陰性。  H DV感染時，HDV Ag陽性?？? HDV IgM 陽性，見于急性HDV感染?？? HDV  IgG陽性，是診斷慢性丁肝的可靠血清學(xué)指標(biāo)。

 4、尖銳濕疣患者外周血中HPVDNA的檢測

尖銳濕疣（CA）病情頑固，極易復(fù)發(fā)。過去的研究一直認(rèn)為HPV是嚴(yán)格的親上皮病毒。但有人研究發(fā)現(xiàn)血液中能檢出HPVDNA。中國醫(yī)科大學(xué)附屬*醫(yī)院皮膚科的研究人員推測尖銳濕疣在HPV感染的病程中可能存在病毒血癥，可能是易感部位CA復(fù)發(fā)或其他部位出現(xiàn)CA病變的病毒來源。為此研究人員對30例CA患者外周血中HPVDNA進(jìn)行了檢測。方法：采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測30例CA患者皮損和外周血中的HPVDNA，20例正常人外周血作對照。采用限制性內(nèi)切酶RsaⅠ、PstⅠ對HPV做分型鑒定。選取1例皮損與外周血均為陽性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序。結(jié)果：30例CA患者皮損均檢出HPVDNA，血漿中未檢測到HPVDNA，有8例外周血單一核細(xì)胞（PBMC）中檢測到HPVDNA（陽性率為26.7％），20例正常人對照為陰性。兩組陽性率經(jīng)χ2校正檢驗χ2＝4.52，P＜0.05，差異有顯著性。酶切和測序結(jié)果顯示，PBMC中的HPV型別與其皮損處的型別有一致性。結(jié)論：CA患者在HPV感染的病程中可能存在病毒血癥，這可能是CA易于復(fù)發(fā)的原因之一。本研究結(jié)果提示，病毒在局部大量繁殖有可能破壞局部基底膜帶，通過血管入血。此外，在PBMC中檢測到HPV提示，該病可能有性傳播以外的途徑經(jīng)血行傳播的可能。

5、評價熒光定量PCR（QPCR）技術(shù)對不孕癥婦女宮頸沙眼衣原體和解脲支原體檢測意義.

方法:用QPCR技術(shù)對60例不孕癥患者（不孕組）及78例正常生育者（對照組）行宮頸沙眼衣原體（CT）和解脲支原體（UU）檢測.結(jié)果:不孕組宮頸分泌物CTDNA、UUDNA及混合感染陽性檢出率明顯高于對照組（P＜0.05＝.結(jié)論:QPCR對不孕癥患者宮頸CTDNA、UUDNA的檢測特意性強(qiáng)、快速、靈敏,臨床應(yīng)用價值高. 
 
 6、快速診斷將宮頸粘膜、皮膚、口腔、角膜等組織細(xì)胞涂片后，用特異性抗體作間接免疫熒光或免疫組化染色法檢測病毒抗原；Wright-Giemsa染色鏡檢，如發(fā)現(xiàn)核內(nèi)包涵體及多核巨細(xì)胞，可考慮HSV感染；將皰疹皰液進(jìn)行電鏡負(fù)染可迅速確診。原位核酸雜交和PCR法可用于檢測HSVDNA。PCR產(chǎn)物的特異性鑒定選用Southernblot法，腦脊液PCR擴(kuò)增被認(rèn)為是診斷皰疹性腦炎的*手段。此外，DNA酶切圖譜也可作HSV鑒定和型別分析。HSV抗體測定對臨床診斷意義不大，僅用于流行病學(xué)調(diào)查



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PCR在臨床中的運用（一）