PCR在臨床中的應(yīng)用（三）

 對(duì)于梅毒（TP）的診斷：敏感性、特異性均高。一般用來(lái)做確證試驗(yàn)。不能用于觀察療效：即使患者經(jīng)過(guò)足夠的抗梅治療，血清學(xué)反應(yīng)仍可保持陽(yáng)性，甚至保持終生。

  目的探討聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）反向膜雜交技術(shù)檢測(cè)臨床標(biāo)本中結(jié)核分支桿菌（TB）DNA的價(jià)值.方法用PCR反向膜雜交技術(shù)檢測(cè)522例結(jié)核及60例非結(jié)核患者臨床標(biāo)本中的TBDNA,同時(shí)用培養(yǎng)、抗酸染色涂片及常規(guī)PCR法作對(duì)照.結(jié)果PCR反向膜雜交法陽(yáng)性率為80.6%（411/690）,培養(yǎng)為18.1%（125/690）,鏡檢為13.9%（96/690）,常規(guī)PCR為59.6%（411/690）,PCR反向膜雜交法與常規(guī)法比較（P＜0.001＝,差異有顯著意義.PCR反向膜雜交法陽(yáng)性檢出率高于常規(guī)PCR（P＞0.05）,但差異無(wú)顯著意義;該技術(shù)假陽(yáng)性為零.結(jié)論P(yáng)CR反向膜雜交技術(shù)檢測(cè)臨床標(biāo)本中TB-DNA具有快速、高度特異性和敏感性,可為結(jié)核病的臨床早期診斷提供一種新的病原學(xué)診斷手段.

   近年來(lái)聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)已經(jīng)用于Hp的診斷，該技術(shù)的敏感性比寡核苷酸探針增加了100倍，可以檢出少至100個(gè)Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已經(jīng)測(cè)出，為PCR特異性引物的選擇提供了依據(jù)。我們以一對(duì)與16SrRNA基因互補(bǔ)的寡核苷酸為引物（CP1/CP2），建立了從胃粘膜活組織標(biāo)本中檢測(cè)Hp感染的PCR技術(shù)。用該方法檢測(cè)Hp標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC 11637，NCTC11848及50株從臨床病人胃粘膜活組織中分離的Hp菌株均產(chǎn)生450bp的片段，其敏感性為0.1pg的HpDNA，相當(dāng)于100個(gè)細(xì)菌細(xì)胞 ，而對(duì)12株非Hp菌株（包括金葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌及空腸彎曲菌NCTC11351）以及無(wú)Hp感染的人胃粘膜細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。我們還用PCR檢測(cè)了96例因上消化道癥狀而行胃鏡檢查的患者，結(jié)果表明PCR檢查的Hp陽(yáng)性率高于常規(guī)檢查法。我們還對(duì)17例經(jīng)不同方案治療后用常規(guī)方法檢查（尿素酶試驗(yàn)、銀染、及培養(yǎng)均陰性）而被認(rèn)為Hp被*的病人，用PCR檢查發(fā)現(xiàn)4例Hp陽(yáng)性。以往我們對(duì)一些常規(guī)方法未能檢出而實(shí)際上還存在Hp的病人，誤認(rèn)為Hp被*而放棄治療，這些病人短期內(nèi)Hp再現(xiàn)實(shí)際上是治療不*，這對(duì)于指導(dǎo)Hp感染的治療有十分重要的臨床意義。
 
   HCMV感染是器官移植受者術(shù)后常見(jiàn)并發(fā)癥之一。HCMV感染系全身感染，臨床表現(xiàn)多樣，與移植排斥反應(yīng)的臨床癥狀十分相似，易于混淆，但二者的產(chǎn)生條件截然相反，在治療上*不同。要弄清器官移植術(shù)后受者的臨床癥狀是否由HCMV感染所致，及時(shí)診斷活動(dòng)性HCMV感染非常重要。HCMV感染是影響器官或組織移植成敗的重要因素。特別在骨髓移植感染中，如不及時(shí)診治，常可引起致命危險(xiǎn)和移植失敗。因此早期診斷和及時(shí)有效的預(yù)防性治療是降低移植術(shù)后HCMV病發(fā)生率和死亡率的關(guān)鍵。熒光定量PCR技術(shù)對(duì)HCMV DNA的檢測(cè)對(duì)感染的檢測(cè)具有臨床應(yīng)用價(jià)值，因?yàn)轶w液中病毒DNA先于病毒感染的臨床癥狀或血清學(xué)證據(jù)的出現(xiàn)，可作為HCMV感染的早期指標(biāo)，對(duì)于HCMV感染疾病的治療和預(yù)防具有重要的意義。由于HCMV可通過(guò)胎盤內(nèi)感染、產(chǎn)道感染等途徑傳播，而且受感染的新生兒死亡率較高，因此利用PCR進(jìn)行早期診斷及采取及時(shí)的治療措施，對(duì)優(yōu)生優(yōu)育也有重要意義。目前對(duì)HCMV感染疾病的治療和預(yù)防主要采用抗病毒藥物。顯然對(duì)抗病毒藥物的療效需要有有效的觀察和評(píng)價(jià)手段。熒光定量PCR對(duì)HCMV DNA可進(jìn)行定量分析，檢測(cè)指標(biāo)穩(wěn)定，通過(guò)對(duì)DNA血癥水平的動(dòng)態(tài)觀察以監(jiān)測(cè)HCMV疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后，及時(shí)調(diào)整免疫抑制劑的用量，指導(dǎo)抗病毒治療，觀察療效，分析是否有耐藥等，因此可作為評(píng)價(jià)各種抗病毒藥物療效的有力手段。




附錄：
PCR在臨床中的應(yīng)用（二）
PCR在臨床中的運(yùn)用（一）