StabyCloning PCR克隆載體系統(tǒng)

Delphi Genetics提供的創(chuàng)新型產(chǎn)品和服務都使用了基于細菌制毒-解毒基因這一*的Staby™技術，極大的提高了DNA克隆的穩(wěn)定性和高效率，促進不含抗生素的重組蛋白的成功生產(chǎn)。其相應的產(chǎn)品是由一系列新穎*的細菌菌株以及相應的克隆和表達載體體現(xiàn)出來，并以Kit的形式提供給客戶使用。其產(chǎn)品領域可分為用于PCR克隆的StabyCloning™，用于原核表達的StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等表達系統(tǒng)，以及相應的感受態(tài)細胞核培養(yǎng)基等產(chǎn)品。

其中StabyCloning™ PCR克隆載體系統(tǒng) （StabyCloning™ Kit）中包含的CYS21菌系染色體中自帶有編碼ccdB毒性蛋白的基因。而相應的克隆載體pSTC1.3則攜帶有縮短的編碼ccdA失活的解毒基因，此載體在縮短的ccdA基因末端線性化后產(chǎn)生平端。當在所要克隆的目的DNA片段的的5’端加入14個堿基對的序列（編碼解毒基因的后四個密碼子以及終止密碼子的堿基序列）時，這樣將這段序列和縮短了的ccdA基因融合即重建了一個有活性的ccdA解毒基因，翻譯成的蛋白CcdA可以“中和”菌株中自帶的CcdB毒性。這個14-bp的序列可以通過一修飾的PCR引物加入要克隆的目的基因片斷中。重組后的質(zhì)粒包含有目的基因片段，但目的基因的走向不同也能導致不同的結(jié)果，只有正確走向的重組質(zhì)粒才能夠重建一個有活性的、完整的ccdA基因。

使用StabyCloning™ PCR克隆載體系統(tǒng)，所有的克隆流程在1h內(nèi)即可完成，所有的克隆是獨立的，并且所有的生長著的菌體都包含了攜帶有正確插入目的片段的克隆載體?；钚詂cdA基因的重建允許重組子的選擇，同時也保證了菌體中質(zhì)粒的穩(wěn)定。一旦一些菌體丟失了載體，即在毒性基因的作用下趨向死亡。當片段插入并克隆后，通過載體上面的限制性位點就很容易得到穩(wěn)定的解毒基因和目的基因的組合。通過CYS21菌系與解毒基因相互之間的特性即可將目的片段有效地插入到克隆載體中。

該系統(tǒng)內(nèi)包含的組分有：線性化的pSTC1.3質(zhì)粒DNA；感受態(tài)CYS21細菌（電轉(zhuǎn)染或鈣轉(zhuǎn)染）；連接酶；重組培養(yǎng)基；測序引物；陽性對照以及操作說明書。額外的感受態(tài)細菌也可以單獨購買：

StabyCloning PCR克隆載體系統(tǒng)的特色：

1. 快速性：連接+轉(zhuǎn)化+平板上生長僅需1h；
2. 精確性：保證了外源基因以正確的方向插入載體內(nèi)，使背景降低到1%；
3. 靈活性：穩(wěn)定的解毒基因和插入目的片段的產(chǎn)物也容易被插入到其他的載體中；
4. 重組子即是一個個獨立的克隆（直接平板培養(yǎng)）；
5. 即使在擴配的情況下也沒有微衛(wèi)星克隆；
6. 以PCR產(chǎn)物為模板當使用AmpR質(zhì)粒時無背景存在；
7. 即使在不使用抗生素的情況下重組質(zhì)粒也很穩(wěn)定；
8. 此系統(tǒng)適用于任何培養(yǎng)基

因此使用Delphi Genetics的StabyCloning™ Kit克隆系統(tǒng)，整個基因克隆的流程控制在1h以內(nèi)，基本無背景（轉(zhuǎn)化后的細菌中都是包含插入片段的，而不含插入片段的細菌會趨向死亡）。PCR產(chǎn)物保持定向插入，質(zhì)粒保持穩(wěn)定，并且插入到其它載體中的產(chǎn)物也容易被篩選，而且在后繼試驗中無需抗生素篩選。

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