氨磺樂靈（Oryzalin）和氟樂靈（Trifluralin）-無(wú)毒染色體加倍劑、秋水仙堿替代品

常見染色體加倍劑：

秋水仙堿（olchicine）氨磺樂靈（oryzalin）和氟樂靈 （trifluralin）這類有絲分裂抑制劑在細(xì)胞有絲分裂過程中可以與微觀蛋白二聚體結(jié)合，從而阻止微管進(jìn)而紡錘絲的形成（Peterson et al., 2003） 。秋水仙堿是zui早用于染色體加倍的試劑，同時(shí)也是zui常用的，然而它具有巨毒性并且在使用、運(yùn)輸上多有限制。氨磺樂靈、氟樂靈作為秋水仙堿的替代品，具有與之類似的染色體加倍能力，并且與秋水仙堿相比，具有無(wú)毒的特性。

有報(bào)道氨磺樂靈處理梨、蘋果、獼猴桃、北美杜鵑、香蕉，均能有效誘導(dǎo)染色體加倍，并且可以有效提高外植體的存活率。如，5 – 30 μM 濃度氨磺樂靈處理單倍體蘋果小苗后染色體加倍效果要比0.25 – 1.25 mM秋水仙堿的處理效果更好；而10 – 20 μM 濃度氨磺樂靈處理4個(gè)香蕉栽培種均可以有效誘導(dǎo)加倍并且顯著提高微芽數(shù)目，如果使用秋水仙堿的話，需要 125 – 200 倍的濃度來誘導(dǎo)產(chǎn)生染色體加倍的效果，并且還對(duì)生苗具有毒副作用。

氟樂靈主要用于蕓苔屬組織培養(yǎng)，在組織培養(yǎng)前18個(gè)小時(shí)用氟樂靈處理甘藍(lán)型油菜（Brassica napus）小孢子可以誘導(dǎo)單倍體胚加倍，并且這些加倍的胚可以正常地發(fā)育和萌發(fā)（Zhao and Simmonds 1995）。此外處理卷心菜（Brassica oleracea var. capitata L.）、小麥小孢子培養(yǎng)物，以及月季分生組織均能有效誘導(dǎo)多倍體化。

溶液配制方法：

氨磺樂靈 （Oryzalin 貨號(hào) O630） 是純度為97.5%的橘黃色粉末，分子量是346.36，不易溶于水，但是極易溶于 DMSO，形成帶淡黃色的澄清溶液 。氨磺樂靈的DMSO 溶液應(yīng)該保存于冰箱中。注意DMSO 在18.5°C 會(huì)“結(jié)冰”。 DMSO 可以增強(qiáng)氨磺樂靈對(duì)植物組織的穿透能力，同樣對(duì)皮膚組織也有穿透性，因此當(dāng)操作DMSO時(shí)必須佩帶手套。在配置氨磺樂靈液體母液的時(shí)候，首先要用DMSO 溶解，然后再用水定容，不論母液是如何配置的，切記DMSO 在組織培養(yǎng)基中的終濃度不得高于1 ml/L. 這一點(diǎn)已經(jīng)被多年植物組織培養(yǎng)實(shí)踐所驗(yàn)證。以下是配置方法：配置濃度為10 mM 溶液時(shí)，先稱取氨磺樂靈 并溶于數(shù)ml 的DMSO.將這些液體分點(diǎn)滴加到 90 ml 水中并不停攪拌，在這一步由于氨磺樂靈 在水中溶解度比較低，約2.6mg/L,所以當(dāng)加入到水中時(shí)必須快速分散開，以免結(jié)晶。 zui后加水定容至100 ml。如果需要獲得更高/更低濃度的溶液的話，可以通過調(diào)整溶液體積獲得。關(guān)于該溶液的長(zhǎng)期保存穩(wěn)定性目前還沒有任何記錄，因此建議短期保存的話可以在冰箱4°保存。

氟樂靈（trifluralin貨號(hào)：T828） 是純度為98%的橘黃色粉末。分子量為335.28。同樣它溶于DMSO但是不溶于水。 溶液的配制、外觀、保存均與氨磺樂靈相同。