AP標(biāo)記蛋白/抗體試劑盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit

堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）是一種普遍存在的二聚金屬酶類，由Suzuki等在1907年首先發(fā)現(xiàn)的。生理作用是非特異性水解磷酸單酯鍵，分子量大小為120kDa，zui適pH值為8.6-10.3，因此稱為堿性磷酸酶。AP廣泛運(yùn)用于酶聯(lián)（ELISA）、Western Bloting以及免疫組化技術(shù)等，作為多個(gè)試劑盒顯色體系的關(guān)鍵成分，對(duì)試劑盒的質(zhì)量有重要影響。堿性磷酸酶比活性高，穩(wěn)定，所以經(jīng)常被用于抗體或其他蛋白質(zhì)的標(biāo)記，而不會(huì)影響偶聯(lián)蛋白的活性和功能。

戊二醛由于具有較低的價(jià)格和較高的活性，已成為zui常用的用于AP偶聯(lián)的交聯(lián)試劑。這種使用戊二醛的AP偶聯(lián)標(biāo)記方法已經(jīng)被廣泛認(rèn)可，但是也存在一定的缺陷，比如在標(biāo)記時(shí)對(duì)戊二醛和抗體間的比率非常敏感，不合適的配比可能會(huì)導(dǎo)致較低的溶解性和酶活力；同時(shí)在標(biāo)記過程中，也很難避免不同活力的混合物出現(xiàn)，因此在偶聯(lián)時(shí)，待偶聯(lián)反應(yīng)發(fā)生后需要進(jìn)行淬滅，純化并去除多余的交聯(lián)物；另外，對(duì)于待偶聯(lián)物不同的制備來源和分子量大小，都會(huì)對(duì)zui終的交聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生較大的影響。馬來酰亞胺（maleimide）也被用于交聯(lián)反應(yīng)，其糖基部分可以與巰基反應(yīng)以形成穩(wěn)定的偶聯(lián)物，但是需要提前對(duì)偶聯(lián)抗體或蛋白進(jìn)行二硫鍵還原處理。

SureLINK AP Conjugation Kits AP偶聯(lián)標(biāo)記試劑盒內(nèi)提供了一個(gè)比上述方法更優(yōu)秀更快捷的AP偶聯(lián)方案。其原理是采用雙偶聯(lián)的技術(shù)分別對(duì)AP和抗體進(jìn)行交聯(lián)，如左上圖所示。琥珀酰亞胺-4-苯甲酸甲酯Succinimidyl-4-Formyl Benzoate （SFB）的醛基與抗體蛋白結(jié)合，同時(shí)Succinimidyl 6-hydrazinonicotinate Acetone Hydrazone（SANH）的肼基偶聯(lián)上AP，這樣通過醛基與肼基之間形成穩(wěn)定的腙鍵而實(shí)現(xiàn)抗體蛋白與AP的偶聯(lián)。

作為即用型的組分，SureLINK™AP偶聯(lián)蛋白/抗體試劑盒能在90分鐘制備完成標(biāo)記HRP的抗體或蛋白。制備好的AP標(biāo)記的抗體或蛋白能在4℃穩(wěn)定保存至少半年。試劑盒內(nèi)包括SureLINK Modified AP（干粉）、AP激活及偶聯(lián)緩沖液、SFB以及AP儲(chǔ)存緩沖液。每毫克經(jīng)SFB修飾的AP可結(jié)合0.1-0.5mg抗體或蛋白，特別適合于AP單克隆抗體的制備。經(jīng)SureLINK AP Conjugation Kits 偶聯(lián)試劑盒標(biāo)記的抗體，結(jié)合相應(yīng)的顯色或化學(xué)發(fā)光底物，可應(yīng)用于ELISA、WB及免疫組化等方法的免疫學(xué)檢測(cè)及定量分析。

SureLINK™ AP標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒具有以下優(yōu)點(diǎn)：

• 方便快速：兩步反應(yīng)（見右），近三個(gè)小時(shí)（20分鐘手動(dòng)工作）就可以完成整個(gè)交聯(lián)反應(yīng)；
• 活性強(qiáng)：可以標(biāo)記從0.05mg到1.5mg范圍的抗體（蛋白）；
• 通用性：可以用于下游各種免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，比如ELISA, Western blotting和免疫組化

除了完整的AP標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒，還有單獨(dú)組分的SureLINK Modified AP（干粉狀的激活A(yù)P）提供。

作為美國(guó)zui早實(shí)現(xiàn)親和素純化二抗商業(yè)化的生物公司，同時(shí)也是世界上zui大的二抗和底物顯色系統(tǒng)的生產(chǎn)商。 KPL一直提供高質(zhì)量的用于分子生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和體外診斷試劑及用于蛋白和核酸檢測(cè)的試劑盒。針對(duì)于蛋白標(biāo)記以及蛋白偶聯(lián)，KPL有HRP及AP標(biāo)記及偶聯(lián)試劑盒，還有專門用于兩個(gè)蛋白質(zhì)之間的偶聯(lián)試劑盒提供。另外還有多種化學(xué)發(fā)光和顯色底物及相關(guān)產(chǎn)品，以及全系列針對(duì)不同種屬的各種標(biāo)記的現(xiàn)貨二抗。如果您對(duì)KPL的產(chǎn)品感興趣，請(qǐng)致電/9569 /8795/4237到西美杰科技有限公司免費(fèi)索取相關(guān)產(chǎn)品資料，或者問詢您所感興趣的產(chǎn)品類型。